试验06试管直接凝集试验.doc

文档介绍：实验 6 试管直接凝集试验(肥达反应)
【目的】
。
、凝集效价的判定及临床意义。
【原理】
试管凝集试验是用已知的颗粒性抗原来检测未知抗体及其相对含量。肥达试验(Widal test)就是用已知的伤寒、副伤寒沙门菌的O和H抗原,检测受检血清中有无相应的抗体的半定量试管内凝集试验。人体感染伤寒或副伤寒沙门菌后,能产生与这些细菌起特异性反应的抗体(凝集素),这种抗体与伤寒或副伤寒沙门菌相混合,在适当电解质参与下出现肉眼可见的凝集现象。本试验是用伤寒杆菌O和H抗原及甲、乙型副伤寒H抗原(以PA、PB表示)与不同稀释倍数的患者血清作试管凝集试验。
【材料】
:伤寒杆菌O、H及甲、乙型副伤寒菌液。
(须经56℃30min灭活)。
、小试管、吸管、水浴箱等。
【方法】
这里介绍单管稀释法。
,排成4排,每排7支。
, ml, ml加入其中混匀,即为1: 20稀释血清,总量为4 ml。
: 20稀释的血清2 ml, ml。(这时中号试管中还剩1: 20稀释血清2 ml)。
ml生理盐水,混匀,即为1: 40稀释血清,总量为4 ml。然后吸取此稀释度血清2 ml。
,并依次加入各管,直至每排的第六管为止。
ml生理盐水,做阴性对照。
ml;在第二排的各管中加伤寒杆菌H ml;在第三排的各管中加PA H ml;在第四排的各管中加PB H ml。 ml菌液,即又被稀释了一倍,所以每排各管中血清的最终稀释度发生了变化。见表6-1。
试验管()
对照管
1号管
2号管
3号管
4号管
5号管
6号管
7号管
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
(NS)
第一排 O抗原







第二排 H抗原







第三排 PA抗原







第四排 PB抗原







血清最终稀释度
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280
-
【结果观察】
(一)结果的观察和判断
观察时在斜射光线下透视,观察试管中悬液的混浊程度及管底凝块的多少。先观察对照管,再分别观察各试验管的凝集情况,并与对照管相比较。根据混浊程度及管底凝块的多少,以“++++”、“+++”“++”“+”符号记录。
++++ :上清液完全澄清,细菌凝集块全部沉于管底。
+++ : 上清液澄清度达75%,大部分细菌凝集块沉于管底。
++ :上清液澄清度达50%,约50%细菌凝集块沉于管底。
+