文档介绍：FNCPLSDM00025 稻米中黄曲霉 B1 含量的测定薄层层析法
F-NCP-LS-DM-00025
稻米-黄曲霉 B1 含量测定-薄层层析法
1 适用范围
本方法适用于粮食、及其制品中黄曲霉毒素 B1 的测定
2 原理
样品中的黄曲霉 B1 经提取、浓缩、薄层分离后,在 365mm 紫外光下产生蓝紫色荧光,
根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。
粉样甲醇提取三氯甲烷萃蒸发苯—乙腈溶
测定最低荧光浓度
计算含量阳性确定试验阳性薄层检验
阴性阴性
3 试剂
三氯甲烷;
甲醇;
石油醚(沸程 60~90℃);
无水乙醚、丙酮;
苯—乙腈混合液:量取 98ml 苯,加 2ml 乙腈,混匀;
甲醇水溶液:55:45(V/V);
硅胶 G:薄层色谱用;
三氟乙酸;
无水硫酸钠;
黄曲霉毒素 B1 标准溶液
仪器校正因子 f:称取 25mg 经干燥的重铬酸钾(基准级),用 硫酸溶解
后并准确稀释至 200ml,相当于 溶液;吸取此溶液 25ml 于 50ml 容量瓶中,用
硫酸定容,相当于 溶液;吸取此稀释溶液 25ml 于 50ml 容量瓶中,
用 硫酸定容,相当于 溶液;用 1cm 石英杯,在最大吸收峰的波长
(接近 350nm 处)用 硫酸作空白,测得以上三种不同浓度的摩尔吸光度,计算
摩尔消光系数的平均值,求出仪器的校正因子;
A
E =
重铬酸钾溶液的摩尔消光系数: M (1)
3160
f =
仪器校正因子: E (2)
式中:A—重铬酸钾溶液的吸光度;
M—重铬酸钾溶液的摩尔浓度。
10µg/ml 黄曲霉毒素 B1 标准溶液的制备:准确称取 1~ 黄曲霉毒素 B1 标准品,
先加入 2ml 乙腈溶解后,再用苯稀释至 100ml,避光,置于 4℃冰箱保存;用紫外分光光度
计测次标准液的最大吸收峰及吸光度值,按下式计算该溶液的浓度,并用苯—乙腈混合液调
到标准浓度恰为 10µg/ml;
A× 312 × 1000 × f
黄曲霉毒素 B1 标准溶液的浓度,µg/ml : X 1 = (3)
E1
式中:A—吸光度;
E1—黄曲霉毒素 B1 在苯—乙腈混合溶液中的摩尔消光系数。
纯度测定:取 5µl 10µg/ml 标准溶液滴加于涂层厚度 的硅胶 G 薄层板上,
用甲醇—三氯甲烷(4:96)与丙酮—三氯甲烷(8:92)展开剂展开,在紫外光灯下观察荧光
的产生,必须符合以下条件:
a. 在展开后,只有单一的荧光点;
b. 原点上没有任何残留的荧光物质。
黄曲霉毒素 B1 标准使用液:准确吸取 10µg/ml 标准溶液于 10ml 容量瓶中,加
苯—乙腈混合液至刻度,此溶液相当于 1µg/ml;吸取此