文档介绍：:比较多,如果单纯一张没有任何显色,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。解决办法:仔细检查抗体是否加错,确认转膜没有问题。上面的图片展示的是一点信号都没有,如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带,可能原因是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,显色液失效。另外如果转膜出现了问题,比如膜放反了,自然是一个白片。:封闭不够好,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够。解决办法:降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数。:一抗非特异性与蛋白结合解决办法::电转中膜和胶之间存在气泡。解决办法:转膜前去掉膜和胶之间的气泡 :膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合解决办法:封闭结束之后要洗。:蛋白量太大,一抗浓度和时间太长解决办法:根据情况调整蛋白量,同时一抗浓度和时间也可以缩短。7. 出现非均一性背景原因:膜可能曾经干过解决办法:在每一步的操作过程中,都需要注意不要让膜干。 :SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒解决办法:配胶过程中要小心,使用无杂质的液体。另外配胶用的水,SDS,Tris缓冲液要注意不要有杂质。:配置胶有问题,胶凝固后不均一解决办法:把胶配好,:电泳电流不均一解决办法:换用新的电泳槽;不使用两边的两孔其他问题(1)蛋白分子量偏高或者偏低。可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应。(2)蛋白质降解。蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带,然后会出现一些其他带,最主要特点是所有的条带比正常的都低,并且条带模糊不清晰。(3)所有条带连成一片没有间隔。原因最可能是上样量过多,其次是样品弥散(比如电泳长时间停止样品弥散)。(4)整个条带呈“︶”状:凝胶冷却不均一,电泳槽老化。(5)整个条带呈“︵”:凝胶左右两头没有凝固好(6)溴酚蓝拖尾:样品溶解不好。(7)纵向的纹理:上样样品中存在不溶性颗粒(8)溴酚蓝很粗:浓缩胶浓缩效果不好,可能是浓缩胶太短,或者是浓缩胶配错。(9)在分离胶中跑不动:Tris-HClPH值不对,或者忘记加SDS。