文档介绍：第 32 卷第 4 期西南林业大学学报 Vol. 32 No. 4
2012 年 8 月 JOURNAL OF SOUTHWEST FORESTRY UNIVERSITY Aug. 2012
:
doi 10. 3969 /j. issn. 2095 - 1914. 2012. 04. 008
不同无土栽培基质微生物 DNA 提取方法研究
王澍芮蕊蔡婷邵云剑樊国盛
( , )
西南林业大学园林学院云南昆明 650224
摘要: 用 4 种 DNA 提取方法对 3 种栽培基质中微生物的 DNA 浓度、腐殖酸去除率、16S rDNA 的
扩增扩增片段限制性内切酶和变性梯度凝胶电泳结果进行比较结果表明: 采用含
PCR 、。 CaCO3
的缓冲液预洗,用缓冲液和蛋白质酶共同作用以裂解细胞,同时添加可有效去
CTAB K 2% CaCl2
除腐殖酸; 用 PEG 8000 沉淀 DNA 和 Sephadex G - 200 纯化,可提高 DNA 质量; 所得 DNA 适用于
PCR 扩增及 ARDRA 技术的限制酶切分析; 在 DGGE 分析中此方法更能显示微生物种群的多样性。
关键词: 基质; 总微生物 DNA; PCR 扩增; 变性梯度凝胶电泳
中图分类号: S718. 46 文献标志码: A 文章编号: 2095 - 1914( 2012) 04 - 0036 - 05
Study on Extraction Methods for
Total anism DNA from Soilless Substrate
, , , ,
WANG Shu RUI Rui CAI Ting SHAO Yun-jian FAN Guo-sheng
( , , , )
College of Landscape Architecture Southwest Forestry University Kunming Yunnan 650224 China
: ,
Abstract parative study was conducted on the results of DNA concentration removal rate of humic
, ,
acids PCR amplification of 16S rDNA restriction endonucleases of amplified fragment and the denaturing gradient
gel electrophoresis of the anisms isolated from 3 types culture substrates with 4 DNA extraction protocols.
The results showed that the humic acids could be effectively removed by precleaning the samples with CaCO3 buff-
,
er cell lysis process synergically assisted with CTAB buffer and proteinase