文档介绍：分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl
(,,) 配制量 1L
配置方法 1. 。
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
约70mL
约60mL
约42mL
4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,。
2、 M Tris-HCl 组份浓度 M Tris-HCl
() 配制量 1L
配置方法。
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,。
3、10×TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
(pH ,,) 配制量 1L
配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(,,) 100mL
500 mM EDTA() 20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠组份浓度 3 M 醋酸钠
() 配制量 100mL
配置方法 1. •3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl, KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4
配制量 1L
配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl 8 g
KCl
Na2HPO4 g
KH2PO4
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. ,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM mM MgCl2。
6、10 M醋酸铵组份浓度 10 M醋酸铵
配制量 100mL
配置方法 1. ~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
。
。
。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚配置方法
1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,,苯酚平衡操作方法如下:
①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1M Tris-HCl(),使用磁力搅拌器搅拌15