文档介绍：分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、 1M Tris-HCl 组份浓度 1M Tris-HCl ( , , )配制量 1L 配置方法置于 1L 烧杯中。 800mL 的去离子水,充分搅拌溶解。 pH 值。 pH 值浓 HCl 70mL 60mL 42mL 1L 。 ,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低个单位。 2、 M Tris-HCl 组份浓度 M Tris-HCl ( )配制量 1L 配置方法置于 1L 烧杯中。 800mL 的去离子水,充分搅拌溶解。 pH 值至。 1L 。 ,室温保存。注意: 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的 pH 值大约降低个单位。 3、 10 × TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl , 10 mM EDTA ( pH , , )配制量 1L 配置方法 ,置于 1L 烧杯中。 1M Tris-HCl Buffer ( , , ) 100mL 500 mM EDTA ( ) 20mL 800mL 的去离子水,均匀混合。 1L 后,高温高压灭菌。。 4、3M 醋酸钠组份浓度 3M醋酸钠( )配制量 100mL 配置方法 ? 3H2O 置于 100 ~ 200mL 烧杯中,加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。 pH 值至。 100mL 。 ,室温保存。 5、 PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl , KCl , 10 mM Na2HPO4 ,2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 ,置于 1L 烧杯中。 NaCl 8g KCl Na2HPO4 g KH2PO4 800 mL 的去离子水,充分搅拌溶解。 HCl 将 pH 值调节至 ,然后加入去离子水将溶液定容至 1L 。 ,室温保存。注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1mM CaCl2 和 mM MgCl2 。 6、 10 M 醋酸铵组份浓度 10 M醋酸铵配制量 100mL 配置方法醋酸铵置于 100 ~ 200 mL 烧杯中,加入约 30 mL 的去离子水搅拌溶解。 100mL 。 μm滤膜过滤除菌。。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。 7、 Tris- HCl 平衡苯酚配置方法 1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在 160 ℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物, 这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致 RNA 和 DNA 的交联等。因此,苯酚的质量对 DNA 、 RNA 的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 3. 苯酚平衡:因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到以上,苯酚平衡操作方法如下: ①液化苯酚应贮存于-20 ℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在 68 ℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入羟基喹啉( 8-Quinolinol ) 至终浓度 %。该化合物是一种还原剂、 RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。③加入等体积的 1M Tris-HCl ( ) ,使用磁力