文档介绍：:..《细胞工程原理与技术》实验计划实验班级:07级指导老师:魏海明吕新怀郑晓东张晓龙金晶实验室负责人:吕新怀******@.,3600453实验1HL-60细胞的培养、传代、复苏和冻存1、HL-,每大组27,27,29人,分9个小组,每小组人,实验材料准备及实验操作以小组为单位。-60细胞,无菌完全RPMI-1640培养液,无菌离心管,无菌吸管,无菌培养瓶,离心机,倒置显微镜,超净工作台,C02培养箱等。-60细胞为悬浮细胞生长的细胞,可在完全RPMI-1640培养液中培养,该培养液由90%不完全1640培养液[RPMI-1640液95亳升;***酸钠1毫升;\1谷氨酰***1亳升;1\1Hepes1亳升;%NallCOs1亳升;青霉素、链霉素(各1万单位)1亳升]和10%灭活胎牛或新主牛血清。传代时不必釆用酶消化法,而可直接传代或离心收集细胞后传代。通常釆用离心方法传代,即将细胞连同培养液一起转移到离心管内,离心800rpmx5min,然后去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液,然后传代接种。根据细胞数量,可采用1瓶传3瓶或其它比例传代。2HL-,细胞内和外环境中的水都会形成冰品,能导致细胞内发牛•机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在一130°C以下的低温中能减少冰品的形成。为了避免污染造成的损失,最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。目前常用的保护剂为二甲亚砚(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。:液氮罐、冻存管(塑料螺口专用冻存管)、离心管、吸管、离心机等。:%胰酶、RPMI-1640培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)。,使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4°C下保存。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:*包含10%甘油的完全培养基,*包含10%二***亚飒(DMS0)的完全培养基,*50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基,或*50%细胞条件培养基和50%含有10%二***亚飒的新鲜培养基。对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是:*50%细胞条件无血清培养基和50%%二***亚砚的新鲜无血清培养基或*%二***业飒和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。(贴壁细胞),将细胞悬液收集至离心管中。,弃上清液。,计数,调整至5X107ml左右。,每管51。。如用安