文档介绍：PCR基因扩增及其产物回收佟丽2008年9月25日基因的克隆与表达专题之一主要内容目的基因AKP的扩增-PCR扩增产物的分离鉴定-琼脂糖电泳扩增产物的回收-胶回收PCR产物目的产物琼脂糖凝胶分析目的基因AKP的扩增-PCR概述PCR技术原理PCR特点影响因素与条件优化关于本次实验PCR(PolymeraseChainReaction)在体外特异性地扩增某个基因。-downPCRRT-PCR兼并引物PCR巢氏PCR反向PCR不对称PCR原位PCRRACE-PCR免疫-PCR(immuno-PCR)MSP***化特异PCR等等…………常规PCRRT-PCRPCR技术原理高温变性低温复性(退火)适温延伸适度循环DNA模板高温变性:双链DNA在受热后,配对碱基的氢键断裂,DNA两条链分开成为单链。95oC3’5’TGCATGCATATCTTGAACTAGAACTTGACGTACGTA5’3’5’TGCATGCATATCTTGAAC3’3’5’TAGAACTTGACGTACGTA模板(template)TGCATGCATATCTTGAAC3’5’5’TAGAACTTGACGTACGTA3’DNA模板与引物复性(退火):引物Primer,人工合成的单链DNA小片段,碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同模板模板ATCTTGAAC5’3’ACGTACGTA5’3’引物引物40-65℃DNA链的延伸:DNA聚合酶按碱基互补配对原则在模板上延伸DNA链。TGCATGCATATCTTGAAC3’5’5’TAGAACTTGACGTACGTA3’模板模板ATCTTGAAC5’ACGTACGTA5’TaqTaq72℃