文档介绍：Q&A
关于标签: 物质描述:名称,浓度,pH值等 配制信息:配制人,配制日期等 班级(周四318或周四佟),组别
关于试剂配制
EDTA(乙二***四乙酸钠),碱性条件下可溶,一般每百毫升加NaOH约4g
Tris-HCl
1mol/L, (25℃)
生化实验室,
MilliQ 水
(已灭菌,PCR专用)
生化实验室,
1640培养基
含FBS 10%,含双抗
(Jurkat细胞专用)
佟丽,
手术器械(已除热源)
佟丽,
PCR基因扩增及其产物回收
佟丽 2008年9月25日
基因的克隆与表达专题之一
主要内容
目的基因AKP的扩增-PCR
扩增产物的分离鉴定-琼脂糖电泳
扩增产物的回收-胶回收PCR产物
目的产物
琼脂糖凝胶分析
目的基因AKP的扩增-PCR
概述
PCR技术原理
PCR特点
影响因素与条件优化
关于本次实验
PCR( Polymerase Chain Reaction)在体外特异性地扩增某个基因。
1993年诺贝尔化学奖
Kary B. Mullis
概述
Saiki
使PCR成为实用的方法
PCR的种类
常规PCR
Touch-down PCR
RT-PCR
兼并引物PCR
巢氏PCR
反向PCR
不对称PCR
原位PCR
RACE-PCR
免疫-PCR(immuno-PCR)
MSP***化特异PCR
等等…………
常规PCR
RT-PCR
PCR技术原理
高温变性
低温复性(退火)
适温延伸
适度循环
DNA模板高温变性: 双链DNA在受热后,配对碱基的氢键断裂,DNA两条链分开成为单链。
95oC
3’
5’
TGCATGCAT
ATCTTGAAC
TAGAACTTG
ACGTACGTA
5’
3’
5’
TGCATGCAT
ATCTTGAAC
3’
3’
5’
TAGAACTTG
ACGTACGTA
模板(template)
TGCATGCAT
ATCTTGAAC
3’
5’
5’
TAGAACTTG
ACGTACGTA
3’
DNA模板与引物复性(退火):
引物Primer,人工合成的单链DNA小片段,碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同
模板
模板
ATCTTGAAC
5’
3’
ACGTACGTA
5’
3’
引物
引物
40-65 ℃