文档介绍：酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)-乙肝两对半测定张君龙严琳临床免疫实验室2016年4月5日主要内容ELISA技术的实验原理ELISA技术的基本类型ELISA技术的操作流程乙肝病毒血清标志物乙肝两对半检测的临床意义酶免疫技术抗原抗体反应特异性酶高效催化反应的专一性酶免疫测定均相酶免疫组化酶免疫技术异相固相液相(定位,定性)(定性,定量)(ELISA)ELISA实验原理将抗体(或抗原)结合到固相载体表面,当加入标本后,相应待测抗原(或抗体)结合到固相抗体(或抗原)上,利用酶标记抗体(或抗原)和相应底物,通过洗涤、显色,测定有色产物的含量,即可检测出标本中待测抗原(或抗体)。ELISA技术基本类型间接法(检测抗体)夹心法(检测大分子抗原;抗体)竞争法(检测小分子半抗原;HBcAb,HBeAb)捕获法(检测某抗体亚型成分,IgM测定)产物颜色深浅和含量成正比产物颜色深浅和含量成反比乙肝病毒血清标志物检测原理血清学标志原理包被试剂标记或结合物结果判断HBsAg夹心法HBsAbHBsAb显色(+)HBsAb夹心法HBsAgHBsAg显色(+)HBeAg夹心法HBeAbHBeAb显色(+)HBeAb竞争法HBeAbHBeAb及中和抗原不显色(+)HBcAb竞争法HBcAgHBcAb不显色(+)HBcAb-IgM捕获法抗人IgMμ链HBcAg及HBcAb显色(+)ELISA操作流程图准备工作(试剂平衡,洗液配制,编号)加样加酶洗涤显色终止反应观察结果两步法需要温育洗涤温育操作步骤平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温(18-25℃)。配洗液:充分摇匀浓缩洗涤液,用蒸馏水按1:19稀释。(已配制)编号:将微孔条固定于支架,按序编号。操作步骤加样:分别用加样枪在孔中加入待测血清样本50ul,阴、阳性对照50ul(1滴),空白不加。加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ul(1滴),空白不加,轻拍混匀。温育:贴好密封膜,置37℃温育30分钟。操作步骤洗涤:用洗涤液充分洗涤6次,洗涤完后扣干(每次洗涤保持30-60秒的浸泡时间)。显色:每孔加底物和显色剂各50ul(1滴),轻拍混匀,置37℃反应10分钟。终止:每孔加终止液50ul(1滴),混匀。观察结果:酶标仪或者肉眼判读。