文档介绍：张俊杰,张立坚,刘春安,张良滔,蔡春*(广东医学院,湛江,524023)摘要:建立液相色谱串联质谱测定组织中全基因组DNA***化水平的方法。采用苯酚***仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,用甲醇溶解,以液相色谱串联质谱检测胞嘧啶和5-***-胞嘧啶含量,并计算全基因组中DNA***化的水平。结果表明,胞嘧啶的线性范围为1~100ng/mL,,~%;5-***胞嘧啶的线性范围为1~50ng/mL,,%~%。胞嘧啶和5-***胞嘧啶的检出限为1pg,~%,~%,胞嘧啶和5-***%~%。本文建立的方法检测组织中DNA***化程度,具有专一性强,操作简便的优点,能较好地满足全基因组DNA***化检测的要求。关键词:DNA***化;液相色谱质谱联用;胞嘧啶;5-***-胞嘧啶AnalysisofGlobalDNAMethylationinTissuebyLiquidChromatographyTandemMassSpectrumZHANGJun-jie,ZHANGLi-jian,LIUChun-an,ZHANGLiang-taoCAIChun*(Guangdongmedicalcollege,zhanjiang,524023)Abstract:Wedevelopedandvalidatearapid,sensitiveandspecificLC/MS/-chloroform,hydrolyzedusing88%formicacidat140℃,spikedwithcytosine-2,4-13C2,15N2asinternalstandard,reconstitutedinmethanolandanalyzedbyLC/MS/MSwithmultiplereactionmonitoringmode,(Cyt)and5-methylcytosine(5mCyt),andthelinearrangeofcalibrationcurvewas1~50ng/mLand1~100ng/mLfor5mCytandCytrespectively,(RSD)~%%~%-%%,whiletheinte