文档介绍：标记免疫技术医学检验系临床微生物学及免疫学教研室二OO四年三月标记免疫技术=抗原抗体反应示踪物标记灵敏性特异性标记免疫技术的主要特点:高特异性、高灵敏性免疫技术+标记技术资料库下载标记免疫技术免疫测定技术免疫组化技术示踪物及标记技术放射免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术化学发光技术金免疫技术⋯⋯⋯资料库下载第八章放射免疫技术类型:放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)免疫放射分析(immunoradiometricassay,IRMA)广义放射免疫技术还包括放射受体分析(使用受体测量抗原)和放射配体结合分析(使用配体研究受体)。特点:灵敏度高(10-9-10-15g/L)、特异性强、重复性好等资料库下载标记物:常用的核素有两大类γ射线:131I、125I、57Cr和60Coβ射线:14C、3H和32P。使用最广泛的是:125I①性质活泼、易制备标记物②对被标记物的免疫活性影响小③测量方法简便、已推广④半衰期较长、核素丰度高资料库下载标记方法125I的标记原理:取代分子中酪氨酸或酪***残基及组***残基上的氢原子方法:直接标记法******T法和乳过氧化物酶法间接标记法联接标记法资料库下载适用分子原理特点缺点直接标记肽类、蛋白质、酶存在酪氨酸、组***残基等基团操作简便、易标记、比放射性高不适于活性功能区的残基标记间接标记甾类化合物、核苷酸等小分子化合物不存在酪氨酸、组***残基等基团,需添加可避免氧化/还原剂对被标记物活性的损伤等添加基团可能影响被标记物活性资料库下载标记物纯化对游离的125I等试剂与标记物进行分离方法:分子筛凝胶过滤;离子交换层析;聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE);高效液相色谱(HPLC)资料库下载标记物鉴定放射化学纯度单位标记物中结合在被标记物上的放射性占总放射性的百分率。一般要求大于95%。免疫活性标记过程中,被标记物活性损伤程度。B/T%>80%,B/T%↑抗原损伤↓。、mCi/mg、Ci/mmol等单位表示。比放射性↑方法更灵敏;过高辐射自损伤大,对标记物免疫活性影响大,储存稳定性差。资料库下载抗血清鉴定多克隆抗体的抗血清是放射免疫分析的主要试剂之一,其质量直接影响方法的特异性和灵敏度。亲合力选用亲和常数K值大(109~1012L//mol)抗血清特异性其程度可直接影响结果的准确性滴度最大稀释度。在本技术方法中是指结合50%标记抗原时的抗血清的稀释度。资料库下载