文档介绍：重组SARSCoVS1蛋白抗原表位分析及抗原性检测作者:邵红伟,蓝东明,陈尚武,刘泽寰,黄树林【摘要】目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒刺突蛋白S1段进行原核重组表达,并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析,根据分析结果选定用于重组表达的区段,利用pET21b载体进行原核表达,将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明,S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位,综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素,选取S1中的关键区域259~56aa进行原核重组表达,得到了包涵体形式的重组蛋白,经过纯化和复性,获得了纯度较高的可溶性S1蛋白;用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定,表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性,为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。【关键词】SARS;S1蛋白;抗原表位;重组表达 Abstract:ObjectiveToexpressandconfirmtheantigenicityoftheS1fragmentofspikeprotEinofSARSTheepitopesrecognizedbyHLAinS1wereanalyzed,binantprotEInwassubjecttoantigenicityassayafterEpitopeanalysisidentifiedthenonamers,whichcouldbepresentedbyHLAmolecule,inS1viewofthedistributionofepitopesinS1protein,binantexpression,binantprotein,theoptimizationofprimersdesign,andsoon,afragment(259~565aa)binantproteinexpressedasinclusionbodywassubjecttopurifying,denaturation,andrenaturation,andpurifiedsolubleS1proteinwasspecialSARSCoVantigenicityofthisproteinwasidentifiedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA):SARS,S1protein,epitope,binantexpression严重急性呼吸系统综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS),又称传染性非典型性肺炎,是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒引起的呼吸系统疾病。自从SARS大规模爆发之后,关于这种新型人类冠状病毒的各项研究,如病原学、流行病学、病毒基因组结构、病毒蛋白的重组表达、临床检测、疫苗的研制、公共卫生管理学等等,也随之快速开展了起来,并取得了很大的进展[1-3]。但作为一种新出现的病毒,人们对它的了解还远远不够,其致病机理迄今还没有被阐明[4],有效的治疗药物还没有发现,疫苗的研制尚处于初期阶段。因此利用现有资源进行治疗性疫苗和抗体的进一步研究非常有意义。 SARSCoV的刺突蛋白是病毒识别宿主细胞表面受体——血管紧缩素转化酶2的关键分子,对于病毒的感染非常重要。许多研究表明,SARS康复病人的血清中普遍存在着抗Spike蛋白的抗体[5,],同时SARSCoV的Spike蛋白也能够有效地诱导中和抗体的产生[7],因此Spike蛋白是进行疫苗和抗体研究的一个比较理想和有效的靶点。位于Spike蛋白N端的S1段是同受体结合的关键部位,也是中和抗体作用的主要作用靶点[8],考虑到整个Spike蛋白的分子量较大、结构复杂,进行重组表达较为不便,选择其关键的S1段进行操作是一种可行的方法。因此本研究基于前期相关研究结果,选取了Spike蛋白的S1段进行抗原表位分析,对其中259~56aa的区段进行了原核重组表达,并对表达产物进行了纯化、复性和抗原性检测。 1材料与方法材料质粒和菌株原核表达质粒pET21b购自Novagen公司;含有SARSCoVSpike全长基因的载体pCAGGS/MCSS由LuisEnjuanes教授惠赠。菌株BL21[FompThsdSB(rBmB)galdcmλ(DE3)(lacIlacUV5Tgene1ind1Samnin5)]和DH5α[supE44,lacU16(Φ80lacZμ5),hsdR17,recA1,endA1,gyrA96,thi1,relA1]均为本室保存。酶类及其他试剂 TaqDNApoly