文档介绍：Cre-loxP、CRISPR-Cas9技术 与病毒载体在基因敲除中的联用2016-04-25Content第一节、Cre-loxP技术第二节、CRISPR-Cas9技术第三节、病毒工具简介第四节、组合应用示例基因操作技术一览Cre蛋白于1981年从P1噬菌体中被发现,属于λInt酶超基因家族。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码343个氨基酸,38kDa,单体蛋白。Cre重组酶不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能特异地在两个loxP位点间发生基因重组。Cre重组酶无需借助任何辅助因子,可作用于多种结构的DNA底物,如线形、环状甚至超螺旋DNA。loxP位点,是locusofX-overP1的缩写,来自P1噬菌体。间隔序列决定loxP的方向,如下所示:-loxP技术简介13bp            8bp            13bpATAACTTCGTATA-NNNTANNN---loxP技术应用启动子靶组织或细胞albumin肝脏insulin胰岛b细胞adiposeprotein2脂肪细胞b-lactoglobin乳腺keratin5皮肤musclecreatinekinase骨骼肌myosin心脏protamine-1精子CD19B淋巴细胞proximallckT淋巴细胞Wnt-1orengrailed-2神经系统与组织特异性启动子结合应用,-loxP技术应用——组织特异性应用启动子诱导物Cre表达的靶组织Mx1IFN肝脏、免疫细胞CMV-tTAtetracycline广泛表达CMV-ERtamoxifen广泛表达与诱导性表达启动子结合应用,对Cre转基因的表达进行控制—-loxP技术应用——-loxP技术仍有不足之处传统的基因打靶技术主要依赖于基因同源重组,利用设计的同源臂替代靶基因片段,从而达到目的。但是同源重组在细胞中的发生概率极低,而且步骤比较复杂、耗时间、费用也比较高。非同源末端连接(nonhomologousendjoining,NHEJ)-Cas9技术