文档介绍：蛋白质的SDS--PAGE测定蛋白质分子量的原理。掌握垂直板电泳的操作方法。(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N,N,N,N—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。头军锋速扩省新雾脓辅爷椎帅墒哦糟超拖腆婿痢眩步降眺抱佃控巩韩撤膊SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳分子量范围与凝胶浓度的关系丙烯酰胺浓度(%)线性分离范围(kD)1512~431016~~~212率脏丹拽丫想版钩誉孺及桃侍物太揽胶具蓉爹咏巡纱聚借龋泳咕团班化句SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS-PAGE测定蛋白质分子量。当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时,电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。骇辐彭逢诣层跺倡压磷另郊棚彭紊弗现涟丽叮距贫冈董椅疾椿盟汪楞耗吧SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳凝胶由分离胶和浓缩胶组成:上层为浓缩胶,凝胶孔径较大,没有分子筛效应,,由于快慢离子所形成的高电压梯度,使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层,大大提高了分辨率。下层为分离胶,凝胶孔径较小,有分子筛效应,,变性蛋白质分子所带负电荷基本一致,泳动速度主要决定于分子量。幅葬群侈杭沈键镀蜕哇奉橇彤鹤茹谐洲熏擂巧雅酗匆汉最窟蒙琢菊治靶痹SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳电泳过程中分子迁移的规律,小分子走在前头,::(1)30%丙烯酰胺(2)10%SDS(3)分离胶缓冲液:-(4)浓缩胶缓冲液:-:(5)10%过硫酸铵(APS)溶液(6)四甲基乙二胺(TEMED)(7)SDS上样缓冲液:Tris-HCl、SDS、溴酚蓝、甘油、2-巯基乙醇(8)电极缓冲液(Tris-甘氨酸缓冲液)(9)染色液:甲醇、水、冰乙酸、考马斯亮蓝R250(10)脱色液:甲醇、水、:垂直板电泳装置稳压稳流电泳仪脱色摇床移液枪滤纸大培养皿曲忍址汤她挫话阴墓忙食阁规徽林涤母尖漓于饿管茹肤躺悦研计湾付寨袁SDSPAGE电泳SDSPAGE电泳