文档介绍：虫草提取物减轻细胞氧化损伤作用
顾宇翔1,李素霞2,庞怀宇2,袁勤生2*
1,上海质量监督技术检验研究院,上海200233,华东理工大学生物工程学院,上海200237;
由于目前人们对化学合成抗氧化药物(如BHT等)的副作用和毒性反应日益担忧,天然抗氧化剂正越来越受到人们偏爱。虫草作为一种名贵的中药、它所特有的药用价值已被普遍证实,但尚没有查阅到虫草减轻细胞氧化损伤方面的报道。本工作以过渡金属离子Fe2+作为自由基产生的来源考察了天然冬虫夏草、蛹虫草及其发酵菌丝体的水和醇提取物减轻细胞氧化损伤的作用。Fe2+既是生物体所必须的过渡金属离子,是体内许多酶的金属辅基,具有重要的生理学作用;但同时它也能催化产生具有细胞毒性的氧自由基并诱导脂质过氧化反应。
1 实验材料
天然冬虫夏草(Cordyceps sinensis)采自四川省,天然蛹虫草(Cordyceps militaris)采于辽宁省沈阳市辉山。人肝癌细胞株SMMC-7721(中国第二军事医学院);人肺癌细胞株95D(华东理工大学药学院);
2 方法
虫草提取物减轻金属离子诱导的95D细胞氧化损伤
虫草提取物提升胞内SOD和CAT水平
胞内SOD和CAT水平的测定分为两组:(a) mmol/L H2O2和50 µmol/L Fe2+,只加样品(10-50 μg/ml)的组,此组设有不加样品的空白。(b) mmol/L H2O2、50 µmol/L Fe2+、样品或茶多酚(10-50 μg/ml)的组,此组设有只加H2O2和Fe2+,不加样品的对照。
超氧化物歧化酶活力测定:联苯三酚自氧化法[179]。
过氧化氢酶活力的测定按照文献[180]:一个酶活力单位(U)定义为在25 ℃,50 mM磷酸缓冲液中(pH ),每分钟分解一个微摩尔过氧化氢所需要酶的量,以U/mg 蛋白质表达。其中过氧化氢在240 nm处的消光系数定为43 mol/(L×cm)。
其它抗氧化指标的测定
虫草提取物减轻自由基对细胞生长的损伤、抑制金属离子诱导的细胞脂质过氧化和降低胞内ROS水平,并以茶多酚作为抗氧化活性对照品。
3 结果
虫草提取物减轻活性氧和自由基对细胞生长的抑制
虫草及其制品的提取物能够缓解自由基引起的生长抑制(见图1),并且细胞的量与加入样品的剂量大致成正比。其中以
50 µg/ml天然蛹虫草和冬虫夏草的水提取物组的细胞存活率最接近空白组,与抗氧化对照品茶多酚的作用相似。
图1 虫草提取物减轻过氧化氢对95D细胞生长的抑制
CCSW:SE:MW:ME:蛹虫草菌丝体醇提取物;NCSW:冬虫夏草水提取物;NCSE:冬虫夏草醇提取物;NCMW:蛹虫草水提取物;NCME:蛹虫草醇提取物。
浅色带:10 μg/ml;灰色带:30 μg/ml;深色带:50 μg/ml。
虫草提取物对细胞脂质过氧化的抑制作用
加入Fe2+和H2O2的对照组比空白组的TBRAS值有很大的上升, μmol/ μmol/106个细胞(见图2)。除发酵冬虫夏草菌丝体外,各样品的加入都可以明显降低脂质过氧化值,而且降低的量与加入的剂量基本呈正比。在8种提取物中以天然蛹虫草降低的TBRAS值最多,不