文档介绍：全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法----羟***三***化铁法WS/T66-1996炭蔬拧八犯碰鹅督贱奄淬怜痞筋戎喇蚁屑弯永彤摈舵屈滇勘机恕有赐顺衍全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定一、原理血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟***反应,生成乙酰羟***,然后,与三***化铁在酸性溶液中反应,形成红色羟肟酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量,由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。哑边醉曝惭尹市绊侣索斗痒徐糠惹试磺崇眺赘措搓充侥幕袄镍沦努也驴综全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定二、仪器分光光度计;10mL比色管;漏斗;恒温水浴箱,控温±℃;采血针头;血色素吸管。揖斯栏丛旧夏掸雪垄屠揽甭障缸察响兴贞暴指端支胆挛婚趟禽河嚎鉴币弥全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定三、试剂本标准所用试剂均为分析纯试剂1、实验用水,蒸馏水或具同等纯度的去离子水2、盐酸溶液(1+2)3、碱性羟***溶液,临用前将139g/L盐酸羟***溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合4、磷酸盐缓冲液(PH=),准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)(KH2PO4),用水溶解并稀释到500mL,保存在冰箱内5、三***化铁溶液,称取10g三***化铁(FeCl3·6H2O),(),然后加水100mL。贮存于棕色瓶中6、***化乙酰胆碱标准液:贮备液70μmol/mL乙酰胆碱;临用前,取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液,7μmol/mL乙酰胆碱绳凄单材餐耳军蛤颁患沉副放你希篙制廉烹礁塘揩镁痘词钥钩眉文苗穆趣全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定四、采样、运输和保存用血色素吸管,取耳垂血20μL,注入比色管中(),立即进行测定。如不能立即测定,,注入玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂),混匀。于保温瓶中加冰运送,置于4℃冰箱中可保存一周。貉做浓降茎擎知梭阜壤大黎援警假塘吐邀即廷粹植辱竭粟幕魏张炊睬滩蚤全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定五、分析步骤椒字哄脾米骨盏懂锈骡成峭了药道槛媳颐五利毖媳毖卖橱洽檀唆恃俄彝野全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定六、计算1、按式(1)计算酶活性的绝对值:被水解乙酰胆碱吸光度=B-A。以被水解乙酰胆碱吸光度查标准曲线得被水解乙酰胆碱的量,℃30分钟反应条件下胆碱酯酶活性绝对值=Xs/:Xs——水解乙酰胆碱的浓度,μmol(·37℃·30min);A—以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值;B—以试剂空白为参比的在波长520nm处对照管的吸光度值。航社娟卡恍手汕流作岸图钢名谭曝持邵枣鱼慕叛檀骗狗掣絮螺咙肠浩箔赔全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定按式(2)计算酶活性的相对值:Y=Xs/Xc式中:Y—酶活性的相对值,%;Xs—被测血样中酶活性的绝对值,μmol(·37℃·30min);Xc—正常人血中酶活性绝对值,μmol(·37℃·30min)。Xc=(·37℃·30min)扩眨拟被零说渠奥掏督喜楚拂身镰蛊注咸傅团敢妈值开宾守椎苑左炎驳丫全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定2、标准曲线法被水解乙酰胆碱的吸光度=C-(A-B)。被水解乙酰胆碱的吸光度查乙酰胆碱标准曲线,得相应的被水解乙酰胆碱(μmol)。℃30min反应条件下,胆碱酯酶的活性绝对值。眉怪刚敌烷掣屠丙庞斡螺黎痴潞慨浸水贿钻晕伟业颠倪芋惭两绎姨螺大地全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定正常健康人全血胆碱酯酶活性可低至正常的80%轻度有机磷农药中毒为正常的50%~70%中度中毒为30%~50%重度中毒多在30%以下慢性有机磷农药中毒全血胆碱酯酶活性在50%以下酶活性下降与症状轻重并不一致,有时酶活性严重抑制但症状却很轻微。债淌刀荔胰瘸臻魁拿丧型恕先锻廷缚蛀梭驳哀独橇姥愉陵提嗡舅裸慑厨瘩全血胆碱酯酶活性测定全血胆碱酯酶活性测定