文档介绍：全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法
----羟***三***化铁法
WS/T66-1996
一、原理
血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。
未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟***反应,生成乙酰羟***,然后,与三***化铁在酸性溶液中反应,形成红色羟肟酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量,由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
二、仪器
分光光度计;
10mL比色管;
漏斗;
恒温水浴箱,控温±℃;
采血针头;
血色素吸管。
三、试剂
本标准所用试剂均为分析纯试剂
1、实验用水,蒸馏水或具同等纯度的去离子水
2、盐酸溶液(1+2)
3、碱性羟***溶液,临用前将139g/L盐酸羟***溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合
4、磷酸盐缓冲液(PH=),准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)(KH2PO4),用水溶解并稀释到500mL,保存在冰箱内
5、三***化铁溶液,称取10g三***化铁(FeCl3·6H2O),(),然后加水100mL。贮存于棕色瓶中
6、***化乙酰胆碱标准液:贮备液70μmol/mL乙酰胆碱;临用前,取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液,7μmol/mL乙酰胆碱
四、采样、运输和保存
用血色素吸管,取耳垂血20μL,注入比色管中(),立即进行测定。
如不能立即测定,,注入玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂),混匀。于保温瓶中加冰运送,置于4℃冰箱中可保存一周。
五、分析步骤
六、计算
1、按式(1)计算酶活性的绝对值:被水解乙酰胆碱吸光度=B-A。
以被水解乙酰胆碱吸光度查标准曲线得被水解乙酰胆碱的量,℃30分钟反应条件下胆碱酯酶活性绝对值= Xs/
式中:Xs——水解乙酰胆碱的浓度,μmol(·37℃·30min);
A—以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值;
B—以试剂空白为参比的在波长520nm处对照管的吸光度值。
按式(2)计算酶活性的相对值:Y= Xs/ Xc
式中:Y—酶活性的相对值,%;
Xs—被测血样中酶活性的绝对值,μmol(·37℃·30min);
Xc—正常人血中酶活性绝对值,μmol(·37℃·30min)。Xc=(·37℃·30min)
2、标准曲线法
被水解乙酰胆碱的吸光度=C-(A-B)。
被水解乙酰胆碱的吸光度查乙酰胆碱标准曲线,得相应的被水解乙酰胆碱(μmol)。℃30min反应条件下,胆碱酯酶的活性绝对值。
正常健康人全血胆碱酯酶活性可低至正常的80%
轻度有机磷农药中毒为正常的50% ~70%
中度中毒为30%~50%
重度中毒多在30%以下
慢性有机磷农药中毒全血胆碱酯酶活性在50%以下
酶活性下降与症状轻重并不一致,有时酶活性严重抑制但症状却很轻微。