文档介绍：导流杂交基因芯片技术在人乳头瘤病毒基因分型的应用
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STRONG【摘要】/STRONG目的探讨对人乳头瘤病毒(HPV)感染进行准确快速基因诊断和分型的方法。方法采用导流杂交基因芯片技术和实时荧光PCR对75例疑似HPV感染的标本进行基因诊断和分型。结果基因芯片阳性28例,其中单一感染21例,多重感染7例;实时荧光PCR阳性25例。二者在阳性结果中有很好的一致性。结论导流杂交基因芯片技术适合临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型。
STRONG【关键词】/STRONG乳头瘤病毒人基因型寡核苷酸序列分析原位杂交
人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是小分子双链DNA病毒,具有强烈嗜上皮性,高度组织和宿主特异性,可致人类皮肤和黏膜异常增生,引起多种良、恶性病变。目前已经鉴定100多种亚型,其中近40种能感染生殖器官。根据其对生殖系统的致癌性不同,可将其分为低危型和高危型[12]。前者包括HPV6,11,42,43等亚型,主要引发良性增生,如尖锐湿疣;后者包括HPV16,18,31,33,45等亚型,常引起恶性转化,如宫颈癌。由于HPV的致病性与其型别密切相关,所以对其进行检测和分型对宫颈癌的早期筛查、防治、预后判断等具有重要的临床意义。笔者对75例疑似HPV感染的标本同时进行导流杂交基因芯片技术(flow
throughhybridizationandgenechip)即凯普导流杂交HPVDNA检测(简称HybrMax)和荧光定量PCR检测,探讨HybrMax在HPV检测中的应用价值。
STRONG1材料与方法/STRONG
、采集、保存75例标本取自2006年6-12月福建医科大学附属协和Medicine医院疑似HPV感染的门诊女性患者,年龄(26±)岁(18~39岁)。采集宫颈口棉拭子标本,将取样后的棉拭子放入备有无菌生理盐水1mL的加盖微量离心管()中,采集的样本在室温放置2h,4℃保存<24h,-20℃保存<3个月,样本避免反复冻融。
(QIAMini试剂盒,德国QIAGEN公司),HPV基因分型检测试剂盒(中国凯普生物科技有限公司),可检测21种HPV亚型,包括13种高危亚型(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59和68型)、5种低危亚型(6,11,42,43和44型)和3种中国人群常见亚型(53,66和CP8304型)。另外在膜上还包括用于质量控制的阴性对照点、内对照点(用于监测PCR反应)和Biotin对照点(用于监测显色系统);HPV6/11、16、和18型实时荧光PCR检测试剂盒(深圳匹基生物有限公司);扩增仪(PE9700,美国ABI公司);
荧光定量PCR仪(LightCycler,瑞士Roche公司);医用核酸分子快速杂分仪(中国凯普公司)。
,13000r/min离心1min,弃上清液,利用QIAMini试剂盒提取DNA,具体操作步骤按试剂盒说明书。
、PCRMIX、Taq酶和DNA模