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文章标题:兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶疫苗的研制及安全、效力试验
兔巴氏杆菌-波氏杆菌二联蜂胶疫苗的
研制及安全、效力试验
兔多杀性巴氏杆菌病(Pm)和兔支气管败血波氏杆菌病(Bb)是家兔的两种主要细菌性传染病,它们传播迅速,一旦在兔场暴发流行,很难根除,经济损失惨重。进行疫苗接种是预防这两种疾
病的最有效的措施。免疫原性好的菌(毒)种和良好的免疫佐剂是保证疫苗免疫效力的必要条件。因此,在Pm和Bb基础菌种研究的基础上,对蜂胶的提取工艺进行了研究,选取了蜂胶乙醇提取液的水溶物作为佐剂,研制疫苗,并进行了疫苗的安全及效力试验。现将该研究结果报告如下。
1材料与方法

(对家兔的致死剂量为8-10个活菌,对小鼠的致死剂量为100个活菌);兔支气管败血波氏杆菌Bb82株(对小鼠的致死剂量为1×107个活菌,对家兔的致病剂量为1×108个活菌)。

(SMS)、马丁肉汤(MB)、硫乙醇酸盐培养基()、酪胨琼脂()、葡萄糖蛋白胨汤()等。

(F)—75管式分离机、索氏回流装置、温控式旋转蒸发器

,(BMS)上,37℃培养18h,然后选取5-10个典型菌落,分别接种于10绵羊鲜血琼脂斜面若干,同上培养后,作为一级种子。在4℃保存,可使用7日。继代次数不超过3代。
,置37℃振荡培养18h,取样用SMS培养基作纯粹检验;置4℃保存,可使用3日。
,37℃培养18h,无菌水洗下菌苔,取样做纯粹检验,同时用平板菌落计数法计算菌液浓度,将菌液浓度调整为200×108个/ml。
,容器密封后,37℃灭活48h,其间振摇6-8次,然后进行灭活检验。本研究灭活检验及无菌检验用的培养基为:SMS、、。置37℃条件下培养48h,无细菌生长说明已完全灭活。
、冻融灭活检验合格的菌液用管式分离机离心除去甲醛,无菌刮下菌苔,用等量的灭菌生理盐水配成原浓度的菌液。小量分装后反复冻融3次,再次进行无菌检验。
,37
℃条件下培养24h,然后选5-10个典型菌落,分别接种于10绵羊鲜血琼脂斜面若干,同上培养后,作为一级种子。置4℃保存,可使用7日。继代不超过3代。二级种子的繁殖以及制苗用菌液的培养、灭活、
,我们采用了醇提水溶法来制备蜂胶佐剂。蜂胶原胶在-20℃冰柜中冷冻过夜使变脆,取出后研磨粉碎,放入深色瓶中,按1:4的比例加入80