文档介绍：粒。将基因从质粒一狽嫌觅和跏两酶切下来后与真核表达载体猪槁肿床《綨蛘婧吮泶镌靥宓墓菇ㄓ朊庖呒觳獗冉摘要克隆载体咭上,然后用和盖兄蟛宓秸婧吮泶镌靥錚希没蚓籘载体,并测序鉴定,和双酶切鉴定。同源性分析结果发现,该株病毒的基将扩增的片断转移到的助口推╩酶切位点以获得能表达蛋白的重组质轮状病毒感染在世界范围内导致婴幼儿以及仔猪的严重胃肠道炎病。轮状病毒性胃肠炎特征:通常是水样泻,并伴有呕吐,发烧的症状。轮状病毒感染常因脱水,水电解质紊乱而继发性死亡。轮状病毒危害最大的是对养猪业,只能通过预防的措施,因而努力生产安全而又有效的疫苗成为首要任务。最初研究主要集中在不同的血清型上,通过中和实验衡量,以表明交叉免疫在保护性上的重要作用。中和性抗体对外壳蛋白蛌的反应在对轮状病毒性腹泻的保护性是否有重要作用,一直很有争议。在轮状病毒感染中,非结构蛋白的保护作用还没有被广泛的研究。但是,最近出现了一些关于这方面的研究。非结构蛋白在病毒的形态发生上起着重要的作用,是病毒的内毒素能导致幼龄鼠腹泻。人和动物轮状病毒的内毒素序列分析表明存在六种不同的基因型.。轮状病毒的非结构糖蛋白是一种细胞内受体,与瞬时性包膜的获得有关,作为一种亚病毒粒子,出芽进入内质网。也能导致细胞内钙离子浓度升高。为了在真核细胞中表达基因,首先把编码株轮状病毒蛋白的基因克隆到被整合到父代载体上。能表达蛋白基因的质粒就被构建成功了。具体步骤如下:第一步,根据基因库中已发表的猪轮状病毒基因的保守序列设计一段寡聚核苷酸含有启动子拖拗菩悦盖形坏鉑魑I嫌我铮土硪欢魏兄罩棺雍拖拗菩悦盖形点魑O掠我铩5诙剑砺肿床《驹贛上繁殖并收获病毒,从病毒中提取总基因组,作为模板进行反转录,通过反转录聚合酶链氏反应,获得基因。应用标准的际趵┰觯姑恳桓鯪锒己蠯虰两个酶切位点。然后将其插入因与株的蛲葱晕%,,通过测序分析和限制性内切酶酶切分析,成功构建了重组质粒用核酸免疫周龄的/∈螅∈蠓殖伤淖椋谝蛔椋⑸/只的载体,第二、三组分别注射同样剂量狽—闹柿#詈笠蛔樽⑸銹—、獀
学位做作者躲象王侠主拍萬年厂月眵曰签字日期:≯仍,年占月』扣独创性声明关于论文使用授权的说明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。写过的研究成果,也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并学位论文作者签名:尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰表示了谢意。本人完全了解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意吉林农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名签字日期:年月日
轮状病毒怯び锥陀仔蠖锔剐旱淖钪饕2≡行┑厍猪断奶后阳性率高达%“竽烈翟斐裳现氐木盟鹗В且桓鋈蛐怨ü参郎题,靠改善水质、改善环境卫生、加强饮食卫生管理不可能控制该病的传播,又无特效治疗药物,且轮状病毒流行株型特别多,易重配更增加了控制该病的难度。本病不仅感染率高,发病率也相当高。该病毒引起的腹泻以幼儿和小龄幼畜最易感染。病毒经消化道进入,存于肠道,在小肠绒毛上皮细胞进行复制,引起肠绒毛萎缩、吸收障碍、电解质失衡等,进而引起大量腹泻,严重者死亡。病变主要限于消化道,胃壁迟缓,小肠黏膜呈条状或弥漫性出血,肠壁变薄。找出与轮状病毒毒力有关的基因位点成为必须。轮状病毒的免疫机制对其疫苗的研究有重要意义。目前,虽然人们还不清楚抗轮状病毒感染的免疫相关物,但已有研究证实轮状病毒的值鞍譾,瑅及与其抗原性有关。蚔是病毒中和反应的主要目标,能诱导产生中和抗体。苡盏疾鶬蜘抗体和固澹氡;ば悦庖哂泄亍等人的研究结果表明盏嫉腎舭抗体可经血液循环进入小肠上皮细胞,在穿过小肠上皮细胞的过程中能与病毒形成复合物,抵抗病毒的原发感染。是轮状病毒的一种非结构蛋白,等人”芯糠⑾挚筃目固宓缇哂姓攵月肿床《镜谋;ぷ饔茫⒅赋鯪赡苁且种病毒肠毒素,与不同型别轮状病毒之间存在的交叉保护有关。与腹泻发病机制中的相关研究将可能为腹泻的治疗开辟新的前景。流行病学及防制进行了深入研究,但腹泻的发病机制尚未完全阐明,国内外尚无特效疗法。因而轮状病毒的防治显得尤其重要。早期实验的轮状病毒疫苗主要是用动物或人的轮状病毒减毒株啻传代获得ㄒ宰艏林瞥傻募醵净钜呙纭S捎谏鲜鲆呙绲牧俅彩匝榻峁灰恢拢芯者又研制了基因重组减毒活疫苗。同时,随着疫苗技术的不断发展还出现了轮状病毒的亚单位疫苗、呙绾秃铣啥嚯囊呙绲刃滦鸵呙纭月昌吉林农业大学硕士学位论文猪衤肿床《綨蛘孀泶镌靥宓墓菇ㄓ朊庖呒觳獗冉
第一篇文献综述第一章轮