文档介绍：PCR扩增技术DNA聚合酶引物引物M13噬菌体Sanger的测序技术引物DNA聚合酶引物引物Mullis的构思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DN***段94℃变性50-65℃退火XX℃延伸TaqDNA聚合酶(thermusaquaticus)酶活性(%)温度(℃)4050607080901001008060402072℃94℃55℃PCR循环一、PCR的基本原理PCR技术实际上是DNA的体外扩增技术。其原理类似于DNA在体内的复制过程。只要提供一个合适的条件――模板DNA、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、四种dNTP原料和合适的缓冲液体系,在一定的温度下,经过重复的过程,就可以完成DNA的体外合成。PCR反应是一个重复进行的DNA复制过程,需要重复进行:模板的解链、引物与模板的结合(粘合)、DNA聚合酶催化新链DNA的合成。这些过程都是通过控制温度来实现的,即通过改变温度引起变性(denature)、退火(annealing)和延伸(extension),使DNA得以复制。1、变性通过加热至95℃左右,使DNA双螺旋的氢键断裂,形成单链DNA,作为反应的模板。2、退火将温度降至引物的Tm值左右或以下(比Tm低5℃,通常为55~65℃),引物与DNA模板互补结合,形成杂交链。3、延伸在DNA聚合酶(一种耐热的DNA聚合酶)的作用下,于70~74℃以引物3′端为起始点按5′→3′方向使DNA新链延伸。上述三步为一个循环,每一循环的产物作为下一个循环的模板,如此经过25-30个循环,可使新生的DN***段得以扩增106-9倍(至少扩增105倍)。PCR的反应原理也就是PCR的基本过程。1234522557294时间(min)温度(℃)PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DN***段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍