文档介绍：Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse蚇生物技术制药蒅第一章绪论螂药学一级学科分类:药物化学、药剂学、药理学、药物分析、生药学及微生物与生化药学二级学科袇★生物技术与生物技术药物的概念袄生物技术药物的分类袃按用途分类:治疗药物、预防药物、作为诊断药物(免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体(McAb)、诊断用DNA芯片)蒁按作用类型分类:细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、RNA干扰(RNAi)药物、基因治疗药物羆按生化特性分类:多肽类药物、蛋白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇(PEG)化多肽或蛋白质药物芅★生物技术药物的特性蚅理化性质特性:相对分子量大、结构复杂、稳定性差芀药理学作用特性:活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性莀生产制备特性:药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目标产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染蚆质量控制特性:质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定(原液、半成品及成品检定等等)肃第二章基因工程制药芃蛋白类药物的特点:结构确证不完全性、具有种属特异性、多功能性、免疫原性莀临床前安全性评价的特殊性:蛋白类药物安全性担忧的性质和来源;受试物的纯度;相关动物的选择;给药剂量的选择;免疫原性;遗传毒性和致癌性(一般不进行常规的遗传毒性实验);药代动力学肇真核细胞表达制品的安全性问题:生产细胞DNA残留的影响、生产用血清的影响螅基因工程药物稳定性研究的相关问题:药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、pH肂基因工程药物的缺陷:生物利用度低,半衰期短;异体蛋白具有免疫原性蒀基因工程菌的修饰改造方法:构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰(降低免疫原性、增加水溶性、延长t1/2)蒈基因工程制药基本环节芃上游阶段:制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞袁下游阶段:培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装薀基本工具:目的基因、各种酶(切割酶、连接酶、修饰酶等)、载体、宿主细胞薅酶切结果:5’粘性末端、3’粘性末端、平头末端羄1U核酸内切酶的酶活性:指在最佳反应条件下反应1小时,完全水解1mg标准DNA所需的酶量蕿影响限制性内切酶反应的因素:蚀DNA样品的纯度:羅DNA的甲基化程度:核酸限制性内切酶不能够切割甲基化的核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒DNA。蒂酶切反应的温度蚂DNA的分子结构螀反应缓冲液组成莆反应时间、反应体积等膄工具酶莁核酸限制性内切酶:识别、水解外源的双链DNA分子上特定的核苷酸序列。主要存在于原核微生物中。袀同裂酶:指来源不同,识别序列相同的酶;进行同样的切割,产生相同的末端螇同尾酶:来源不同,识别序列不同,但产生相同的粘性末端薂DNA甲基化酶:具有宿主专一性,对宿主自身DNA上特定核苷酸进行甲基化修饰,避免被自身限制性内切酶水解膀DNA连接酶罿T4噬菌体连接酶:连接双链DNA切口,或带粘性末端或平头末端的DNA片段袄大肠杆菌DNA连接酶:连接双链DNA切口,或带粘性末端的DNA片,不能连接带平头末端的DNA片段芄聚合酶:以DNA或RNA为模板,将核苷酸连续加至3’-OH末端,合成方向为5’→3’。DNA聚合酶、RNA聚合酶罿大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ:5’→3’DNA聚合酶活性;5’→3’DNA外切酶活性;3’→5’DNA外切酶活性;RNAH酶活性罿Klenow酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性芅T4噬菌体DNA聚合酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性。外切酶活性比Klenow酶强200倍,对单链DNA作用强于双链DNA螂T7噬菌体DNA聚合酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性膂TaqDNA聚合酶艿反转录酶:催化以RNA或DNA为模板,合成DNA;具有RNAH酶的活性袅末端脱氧核苷酸转移酶:催化dNTP沿5’→3’聚合,逐个加于线性DNA分子的3’末端;不需要模板蚃载体:(vector)来源于质粒、噬菌体或病毒的DNA分子,可供插入或克隆目的基因或DNA,并具有运载外源DNA导入宿主细胞的能力。羀质粒载体:cDNA);开环DNA(ocDNA);线状DNA(lDNA)荿质粒的三个重要性质:遗传传递的能力;遗传交换的能力;不相容性芆用于克隆的质粒的三个要素:复制子、选择标记、多克隆位点肁常用质粒载体:克隆载体、表达载体、突变载体、报告载体虿λ噬菌体载体:插入型载体、置换载体葿来源于噬菌体DNA,因可以插入较大DNA片段,常用于构建基因组文库和cDNA文库。蚇目的基因的常用制备方法袃化学合成法:前提:基因的DNA的序列已知。小于1