文档介绍：人脑脊液吲哚类物质的快速高效液相色谱检验法
作者:陈亚琼黄艳红王健辛晓燕叶雪清
【关键词】高效液相色谱
关键词: 高效液相色谱;脑脊液;吲哚类
0 引言
5-羟色胺(5-HT)是重要的中枢神经递质,与其前体色胺酸(TRP)、5-羟色胺酸(5-HTP)和代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)统称为吲哚类物质,是研究中枢5-HT代谢的重要指标[1,2] .为了了解中枢5-HT的代谢状况,我们采用高效液相色谱法[3,4] 测定妇女脑脊液中四种吲哚类物质获得满意效果.
1 材料和方法
材料
仪器日本日立公司的高效液相色谱仪包括638-53型主机;650-10LC荧光检测器;色谱柱:YWG-C18 H37 ,150mm×4mm;颗粒直径5μm;预柱:YWG-C18 H37 ,50mm×4mm.
标准品及试剂标准品:色胺酸(BDH,批号5507760,AG)、5-羟色胺酸(FLUKA,批号56590,AG)、5-羟色胺(Switzerland,批号,AG)、5-羟吲哚己酸(5-HIAA,批号Fluka,AG).试剂:磷酸二氢钾(西安化学试剂厂)、甲醇(西安化学试剂厂AG).
方法
储备液、标准液的配制精确称取不同量的4种标准品,用甲醇(V)∶水(V)=80∶20稀释成不同浓度的混合储备液(TRP710mg・L-1 ,5-HTP310mg・L-1 ,5-HT380mg・L-1 ,5-HIAA230mg・L-1 ),测定样品前稀释1000倍成为工作液.
工作条件流动相A液:甲醇800mL・L-1 ;流动相B液:KH2 PO4 (・L-1 ,):甲醇955mL・L-1 .线形梯度:流动相从0增加到35%,℃,荧光波长290/330nm,狭缝10,灵敏度1.
样品预处理取妇女腰池脑脊液30μL以5000r・min-1 ,4℃离心5min,上清液置于带盖聚已稀塑料管内,储于-20℃.
2 结果
标准曲线各标准品的线性范围、相关系数、直线回归方程、标准品峰高的变异系数和相对误差见表1,取标准品峰高均值按相关关系计算可得相应品峰浓度.
表1 各标准品的线性范围、相关系数和直线回归方程(略)
回收率和灵敏度回收率平均为(±)%.最低检测线10pg.
色谱分离图及样品检测结果标准品和脑脊液样品色谱分离见图1,对2组不同年龄妇女脑脊液检测结果见表2.
图1 略
表2 妇女脑脊液中吲哚类物质浓度(略)
3 讨论
我们采用高效液相色谱反相梯度结合洗脱结合自然荧光检测法,一次进样20μL同时分析人脑脊液中TRP,5-HTP,5-HT,5-,~15μg,,