文档介绍：快速法用于HIV抗体检测的探讨
作者:张宏宾周品众王亚平
【摘要】目的在HIV抗体检测中比较快速法与酶标法的敏感性,观察快速法能否用于HIV抗体的初筛。方法用酶联免疫法(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和胶体硒法(ICA)对同一阳性标本的不同稀释度作检测,比较这三种方法的敏感性。结果三种方法的敏感性不同, ELISA敏感性最高,PA次之。结论快速法不适于HIV抗体的初筛,即使要使用,应以ELISA的结果作为最终报告。
【关键词】快速法 ELISA HIV
相关规范明确提出可以用快速检测方法对应急、门诊急诊的HIV抗体作检测,主要有明胶颗粒凝集试验(PA),免疫渗滤试验,免疫层析试验等[1]。但规范中未明确经快速法检测的阴性结果能否直接发出阴性报告,甚至有某些检测机构用快速法检测的阴性结果直接发出了阴性报告,笔者认为存在较大的漏检可能。据此,笔者选取日常工作中检测出的一份阳性标本,用酶联免疫法(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和胶体硒法(ICA)对该标本的不同稀释度作检测,比较这三种方法的敏感性,报告如下。
1 材料与方法
标本来源:本实验室日常工作中用ELISA检出的HIV抗体呈阳性反应的血清,经上级单位用免疫印迹试验(WB)确认为阳性;收集经检测为HIV抗体阴性的血清,混合,灭活,经二种以上ELISA试剂确认为阴性。
试剂:ELISA试剂采用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法),批号2011051112;PA试剂采用艾康生物技术(杭州)有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(乳胶层析法),批号200909129;ICA试剂采用Abbott Japan Co.,(HIV)1+2型抗体诊断试剂盒(胶体硒法),批号10303K100。所有试剂均在有效期内使用。
主要仪器设备:Anthos 2010酶标仪,Finnpipette(20-200μL)加样器,均在检定/校准有效期内使用。
方法:将阳性血清用灭活的阴性血清稀释成1:1×103、1:5×103、1:1×104、1:5×104、1:1×105、1:5×105、1:1×106等不同稀释度,分别用ELISA、PA和ICA按各自说明书所示检测,为保证样本量的一致,加样量均为50μL。
结果判断:快速法的结果由2-3人同时判读,以最大稀释度计,不管阳性的强弱均作阳性论;酶标法以样本的OD值与Cutoff值之比(S/)计。
2 结果
三种方法的检测结果见表1。对于笔者所选的阳性标本因暂时无法准确定量到NCU/mL,故仅用稀释度表示,ICA的敏感度在1:5×103~1:1×104,PA的敏感度在1:5×104~1:1×105,ELISA在10-6稀释度S/(阳性反应)。
表1 三种方法对同一样本不同稀释度的检测结果
+表示阳性反应,-表示阴性反应。
3 讨论
由表1可知,三种方法的敏感性不相同,与其他二种快速法相比,ELISA敏感性最高,这与文献[2、3]是完全一致的。笔者在工作中发现某些检测机构用一种快速方法对HIV抗体初筛,阳性者用ELISA复检,阴性者直接发出报告,存在较大漏检的可能。以