文档介绍：:常温   储存:2-8℃  一年;-15℃至―20℃ 二年以上  ,推荐使用在50代以内的细胞进行转染实验。要求在转染前24小时对细胞再次传代,在培养基中加入抗生素对转染效果没有影响。转染时细胞密度一般应为60-80%,但这因细胞株的不同而变化,对最常用的细胞株建议细胞密度为70-90%。以24孔板的转染为例,最理想条件是在转染前24小时,每孔接种(500µl)-2×105个细胞。在大多数情况下,如果在细胞贴壁后(接种几小时后)即进行转染,也可以得到相近的结果。表1列举了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。 ,推荐使用高纯度的质粒。仅仅根据DNA电泳条带的情况估计DNA的量和纯度是不够准确的。建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测,DNA含量(μg/mL)=50×(260nm的读数)×稀释倍数,通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280)估计核酸的纯度,OD260/OD280值应该≥。转染时不同品质的DNA用量不同,以24孔板转染为例,使用酚氯仿沉淀法提取的质粒DNA一般每孔需要加入≥2μg质粒DNA,-1μg质粒DNA。                                                                                                           表1 不同细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐细胞数量细胞培养装置接种细胞数量每装置面积(cm2/孔或皿)细胞培养液总体积(每孔或每皿)*96孔板10000------1ml12孔板80000--2ml6孔板/35mm培养皿200000--4ml60mm培养皿400000-800000285ml-10ml100mm培养皿1000000––20ml140mm培养皿2×106–5×10615320ml–40ml为了提高转染效率可以首先使用低细胞培养液总体积,转染2h小时后补加一倍的含血清细胞培液。 ,在转染过程中细胞培养基中包含血清反而可以提高转染效果。但是在MPEI和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。转染复合物的制备过程中可以使用不含血清的培养基或细胞实验室常用的PBS稀释质粒DNA和转染试剂。Ⅰ的用量在体外细胞转染试验中,对于接种细胞密度在60%-90%之间的实验样本,可通过预试验在MPEI(μl)∶DNA(μg)=2∶1-6∶1之间选择最佳的比例。对大多数细胞MPEI(μl)∶DNA(μg)的推荐比例为2∶1。在动物体内转染试验中,动物肿瘤模型的建立需要根据研究情况进行选择;核酸的给药剂量可根据需要进行调整,其与MPEI的使用比例最好通过体外细胞水平的实验确定,但通常DNA/RNA/siRNA/(μg):MPEI(μ