文档介绍：青枯菌基于 c1 细胞色素信号肽序列的 PCR 特异性检测
KANG, MAN JUNG1, MI HEE LEE1, JAE KYUNG SHIM1, SANG TAE SEO2, ROSEMARY
SHRESTHA3, MIN SEOK CHO1, JANG HO HAHN1, AND DONG SUK PARK1*
1National Institute of Agricultural Biotechnology, Rural Development Administration, Suwon 441-707, Korea
2Korean Forest Research Institute, Seoul 130-172, Korea
3Central Department of Botany, Tribhuvan University, Kirtipur, Kathmandu, Nepal
Received: March 13, 2007 Accepted: May 25, 2007
摘要:本文运用 PCR 方法检测可造成多种农作物细菌性枯萎病的青枯菌。根据青枯菌的 c1 细胞
色素信号肽序列设计了一对引物对 RALSF 和 RALSR 用于青枯菌的特异性检测,结果表明,从13
个来源于不同国家青枯菌菌株中均扩增到一条 932 bp 的片断,而在其他 21 个菌株分别为
Ralstonia,Burkholderia,Xanthomonas,andFusariumoxysporumf.sp.
条带。青枯菌的 c1 细胞色素信号肽序列的特异性通过斑点杂交方法得到了进一步的验证。而且,
这对引物能够检测人工接种青枯病病菌的土壤与番茄植株。因此,目前研究表明这对引物能够有
效地用于土壤中与寄主植物体内的青枯菌检测。
关键词:青枯菌,PCR, 细菌性枯萎病,c1细胞色素信号肽序列,检测,诊断
青枯菌是一种重要的,广泛分布的茄科细菌性病害,在热带、亚热带及温带地区均有分布。
它能够侵染 200 多个种,50 个属以上的植物[11]。最近,欧洲许多地方的马铃薯正在遭受青枯病的
危害[13, 28],因此,迫切需要有效的诊断方法与特异性检测手段。根据对碳源的利用青枯菌可分为
5 个专化型[9, 10],根据寄主范围它分为 6 个小种[4, 21]。土壤中青枯菌常用的检测方法是将土壤悬浮
液涂布在特定的培养基上[7, 8],但是,涂板技术在不同土样之同存在很大的变化,供试的土壤中含
有大量的微生物,会盖过或抑制青枯菌的生长[22, 29]。同样,虽然血清学方法也能运用于植物与土
壤青枯菌的检测且能够增加敏感性,但也存在增加土壤悬浮液中腐生细菌数量的风险,在ELISA分
析中会导致假阳性反应,特别是当使用也多克隆抗体的时候[5, 22]。
因此,几种基于PCR方法已被运用于检测青枯菌的方法。Seal等[27]提出利用 16S rDNA序列检测
青枯菌,Boudazin等[3]根据16S rDNA序列的设计了几对引物并进行了大量的菌株试验,证明这些引
物可以检测到种的水平。然而,上述两种方法在检测青枯菌方面具有很大的局限限性,主是要