文档介绍：时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析
【关键词】时间分辨荧光免疫酶联免疫法乙型肝炎病毒乙肝五项
时间分辨荧光免疫(简称TRF)分析法是用三价稀土离子作为示物,标记蛋白质,多肽,激素,抗体,核酸探针或生物活性细胞,待反应体系发生后,用时间分辨光分析仪测定最后产物中的荧光强度,以此来判断反应体系中被测物质的浓度,笔者结合患者血清学指标乙肝五项(聚合酸链反应)性,初步探讨TRF在检测乙型肝炎病毒中的临床价值,报道如下:
1 实验资料
材料和仪器 200份血清均为ELISA法确诊为HBV感染者,同时抽样检测乙肝五项定量(TRF)。乙肝五项(ELISA)试剂由万泰生物药业股份公司提供。TRF试剂由上海新波生物技术有限公司提供,时间分辨荧光分析仪也是上海新波生物技术有限公司提供。
原理和方法
技术原理:TRF采用了双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法,其中抗原与已包被的抗体结合成抗体抗原复合物,洗涤后再加入銪标记抗体与已结合的抗原联接成抗一抗体—抗原—抗—抗体—Eu复合物。增强液将标记在抗体上的Eu3+离子解离到溶液中,在溶液中Eu3+离子和增强液形成了高荧光强度的螯合物。荧光强度和样品中的抗原浓度成正比。
实验方法严格按说明书操作,将试剂盒放置室温平衡,配备洗涤液,使用前一小时内按1:50倍稀配备銪标记物,吸取100ml样本及对照,按顺序加入微孔反应小孔中并加贴封片,放37度恒温1小时,用洗板机洗涤4次拍干,再每孔入100ml已稀释的销标记物、加封条,放37度1小时,第2次孵育结束后,洗板机洗涤6次,拍干,每孔加入增强液100ml,然后在室温下用振荡仪振荡5分钟,上分析仪检测。
2 结果
乙肝五项定量参考范围,HBSAG:0-,HBsAb:0-10mIU/ml,HBeAg:0-,HBeAb: 0- ,HBCAb:0-。
表1 200例标本乙肝五项定量与酶联免疫测试HBV含量关系
3 讨论
TRF采用于双抗体夹心时间分辨荧光分析法,,可准确定量出0-1010个拷贝的病原体,可清楚的反映出HBV的感染和复制情况,该技术在一整套时间分辨荧光免疫分析仪中进行,整个过程可在2个半小时完成,设备自动化程度高,操作简单,而且保证了检测的准确性和特异性,HBSAg的检测可协助乙肝的早期诊断,在乙肝病人中HBSAg检出率在70%以上,可协助乙肝的鉴别诊断,阳性者可能为急性、慢性患者,乙肝潜伏期或无症状携带者,有助于乙肝的预后估计,定量检测血清中HBSAg,对乙肝病人动态疗效