文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制研
究
姓名:陈军
申请学位级别:博士
专业:劳动卫生与环境卫生学
指导教师:徐顺清
2011-05
华中科技大学博士学位论文

武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药
分子机制的研究
博士研究生: 陈军
导师: 徐顺清教授

中文摘要
结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病。在结核病防治过程中结核分枝
杆菌耐药尤其是多重耐药结核病(MDR-TB)已成为有效控制结核病的重要障碍。氟喹
诺酮类药物是治疗结核病的二线药,尤其是用于耐多药结核病的联合治疗的核心药物
之一。MDR-TB 的病人一旦对氟喹诺酮类耐药,病人的预后将更差。氟喹诺酮类药物
主要作用于细菌的 DNA 旋转酶,使细菌 DNA 复制受阻,从而导致细菌死亡。DNA
旋转酶由 gyrA 和 gyrB 基因编码。研究表明,细菌 gyrA 和/或 gyrB 基因上有一段核
苷酸序列与喹诺酮耐药性密切相关,称为喹诺酮耐药决定区(QRDR)。QRDR 碱基的
改变引起相应的 DNA 旋转酶的改变,从而导致细菌耐药。1994 年,Takiff HE 首先克
隆并测序了结核分枝杆菌的 gyrA 和 gyrB 基因,开始从分子水平研究结核分枝杆菌对
氟喹诺酮类药物的耐药机制。在一些氟喹诺酮类药物耐药的结核分枝杆菌中,发现在
gyrA 基因的 QRDR 存在突变,突变主要集中在 90、91、94 位氨基酸,而 gyrB 基因
的 QRDR 突变少见,但也在一些氟喹诺酮类药物耐药的结核分枝杆菌中未发现 gyrA
和 gyrB 基因的 QRDR 突变。其它的耐药机制如外排泵在临床结核分枝杆菌分离株中
在氟喹诺酮耐药中的作用,需要进一步的研究。
因此,为了解武汉地区结核分枝杆菌对氟喹诺酮的耐药情况,我们收集了一定数
量的结核分枝杆菌,测定了这些菌株对主要抗结核药物的体外敏感性。对氧氟沙星耐
药的结核分枝杆菌,测定了四种氟喹诺酮类药物最小抑菌浓度(MIC),了解新一代
的氟喹诺酮能否用于治疗氧氟沙星耐药的结核分枝杆菌。采用 DNA 测序技术,检测
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氧氟沙星耐药和敏感结核杆菌菌株是否存在突变及突变类型,是否存在新的突变,探
讨快速检测耐氟喹诺酮类药物结核杆菌的方法及结核杆菌对氟喹诺酮类药物耐药的
分子机制,为进一步研究是否存在其它的耐药机制打下基础。

第一部分结核分枝杆菌对抗结核药物的耐药性分析
目的通过对武汉市结核病防治所检验科收集的 1223 株结核分枝杆菌药敏结果
分析,了解初复治涂阳患者的结核分杆菌耐药情况,指导临床医生合理选择抗结核药
物和治疗方案。
方法收集 2008 年武汉市初治涂阳病人结核分枝杆菌菌株 688 株和武汉市结核
病防治所检验科 2008 年至 2009 年两年间复治涂阳病人 535 株结核分枝杆菌的药敏数
据进行分析。
结果药敏试验结果显示:在 1223 株结核分枝杆菌分离株中,结核分枝杆菌的
总耐药率为 %,其中,初始耐药率为 %,获得耐药率为 %。结核分枝杆
菌的总耐多药率为 %,其中,初始耐多药率为 %,获得耐多药率为 %。对
6 种抗结核药物的耐药率:链霉素(SM) %、异烟肼(INH) %、利福平(RFP)
%、乙胺丁醇(EMB) %、氧氟沙星(OFX) %、卡那霉素(KM) %,其中,
在初治组,6 种抗结核药物的耐药率:SM %、INH %、RFP %、EMB
%、OFX %、KM %;在复治组,对 6 种抗结核药物的耐药率:SM %、INH
%、RFP %、EMB %、OFX %、KM %。在 MDR-TB 菌株中,OFX
的耐药率为 %(43/155),KM 的耐药率为 %(8/155)。
结论复治涂阳病人的耐药率比较高,成为结核病预防控制的威胁,需根据药敏
结果合理选择治疗方案。

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第二部分四种氟喹诺酮类药物对结核分枝杆菌的
最小抑菌浓度的比较
目的用刃天青显色法快速测定四种氟喹诺酮对结核分枝杆菌的最小抑菌浓度
(MIC),探讨不同氟喹诺酮对结核分枝杆菌的作用和可能的交叉耐药性。
方法用 65 株对氧氟沙星敏感的菌株(包括 42 株耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)
菌株)和 60 株氧氟沙星