文档介绍：肾康丸对培养的大鼠系膜细胞增殖、细胞外基质分泌和细胞周期的影响
【摘要】观察肾康丸对体外高糖培养的大鼠系膜细胞(MC)增殖、细胞外基质分泌(ECM)和细胞周期的影响。【方法】将16只Wistar雄性大鼠随机分为4组,即正常血清组,开搏通组(剂量为5ng/kg,肾康丸高、、),灌服相应药物7d,分离制备药物血清。将体外高糖(30mmol/LGlu)培养的MC分为5组:高糖模型组(30mmol/LGlu),正常血清组(体积分数5%正常血清),开博通组(5%开博通血清)及肾康丸高、低剂量组(5%肾康丸高、低剂量血清),另设低糖(10mmol/LGlu)模型组。培养72h后,采用四甲基偶氮噬盐(MTT)法测定各组细胞增殖,双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清纤维连接蛋白(FN)含量,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】高糖培养的MC显著性增殖,上清FN含量显著性增加,并出现细胞周期异常,肾康丸能抑制MC增殖,减少FN分泌,并使Go/G期细胞比例显著性增加,而与期及G2/M期细胞比例减少。【结论】肾康丸可通过调整MC细胞周期异常,进而抑制高糖诱导的MC增殖和ECM分泌。
【关键词】肾康丸药理学糖尿病肾病中药疗法细胞周期胞培养大鼠
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)全身性微血管并发症之一,也是导致DM患者死亡的重要原因。约40%的Ⅰ型DM和5%~10%的Ⅱ型DM患者可以发生DN。DM可由多种途径损害肾脏,并累及肾脏的所有结构,从肾小球、肾血管直到肾小管和肾间质,随着病情的进一步发展,可影响肾功能不可逆转,最终导致终末期肾功能衰竭[1]。迄今为止,西医除强调控制血糖、血压外,对该病尚无特效药物。中药制剂肾康丸在临床用于治疗DN多年,具有确切的保护DM患者肾脏的作用[2-3]。肾小球系膜细胞(Mesangial cell,MC)的变化在肾脏疾病的发病中具有重要的作用[4]。为进一步探讨肾康丸治疗DN的作用机制,我们观察了肾康丸对体外高糖培养的MC增殖、纤维连接蛋白(in,FN)分泌和细胞周期的影响,并与血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制剂开博通作对照。现报道如下:
1 材料与方法
动物和细胞株 Wistar雄性大鼠,体质量190~230g ,购于南方医科大学(原中国人民解放军第一军医大学)动物实验中心,合格证号:粤检证字第2004A031号;大鼠MC细胞株,购于武汉大学。
受试药品和主要试剂肾康丸由黄芪、芡实、金樱子、玉米须、水蛭等组成,南方医科大学珠江医院药剂科生产,批号:20031214;开博通片由上海中美施贵宝药业有限公司生产,批号:0402032。RPMI1640干粉为美国GIBCO公司产品;小牛血清由杭州四季青生物工程研究所提供;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚枫(DMSO)、碘化丙啶(PI)染液、L谷氨酰胺和HEPES均为美国Sigma公司产品;丙酮酸钠为AMRESCO公司产品;RNA酶(Rnase)为上海生工产品;FN双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒由美国Diagnositca公司提供。
主要仪器 CO2培养箱由广