文档介绍：bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:史梦,冯文莉,黄世峰,曾建明,王小中
【摘要】目的: 建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响. 方法: 彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测. 结果: 彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50 μmol/L终浓度的H2O2对BaF3MIGR1细胞和BaF3P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10 min. BaF3P210细胞与BaF3MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60 min即可达到完全修复,而后者在损伤后120 min才能完全修复(). 结论: 建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3P210细胞的DNA损伤后修复能力.
【关键词】融合蛋白质类,bcr/abl;白血病,髓样,慢性;DNA损伤;DNA修复
0引言
慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)的发生是由于 t(9;22)(q34;ql1)所致的bcr/abl融合基因编码产生具有强烈酪氨酸激酶活性的bcr/abl融合蛋白,该蛋白异常激活多种信号转导通路而导致血细胞的恶性转化[1]. bcr/abl融合基因的表达可能引起DNA损伤修复功能异常,与CML的发生、发展及耐药性表型密切相关,但具体机制仍然有待阐明[2-3]. 我们以表达bcr/ablP210融合蛋白转化细胞株BaF3
P210为对象,以空载体感染细胞株BaF3MIGR1为阴性对照,经H2O2染毒后建立DNA损伤模型,并对细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测,探讨bcr/abl对细胞DNA损伤修复功能的影响.
1材料和方法
;低熔点琼脂糖、溴化乙啶(EB)为Sigma公司进口分装,H2O2等试剂均为国产分析纯级产品;倒置荧光显微镜(日本OLYMPUS),水平电泳仪(BIORAD公司). bcr/ablP210转化细胞株BaF3P210和空载体感染细胞株BaF3MIGR1由本课题组构建. BaF3P210细胞用含100 g/L FCS的PRMI 1640液培养于含50 mL/L CO2的37℃恒温培养箱中. BaF3
MIGR1细胞用含100 g/L FCS, 100 g/L WEHI3条件培养基(细胞生长所需IL3来源)的PRMI1640液培养,培养箱条件同前.

MIGR1细胞和BaF3P210细胞细胞(1×108/L)分别用1, 10, 50, 100, 200 μmol/L终浓度的H2O2于4℃下染毒10 min,立即收集细