文档介绍：As2O3对ALL Caspase-3原代细胞的作用及作用机制的研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】目的探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病(ALL)原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据。方法采用MTT法检测As2O3对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;-,并呈时间与浓度依赖性。结论As2O3可诱导ALL原代细胞凋亡;As2O3通过激活Caspase-3诱导ALL原代细胞凋亡
【关键词】As2O3急性淋巴细胞白血病细胞凋亡Caspase-3Bcl-2
急性淋巴细胞白血病(ALL)是临床常见的白血病类型,但成人ALL特别是难治及复发性患者的治疗仍是血液病工作者面临的一大难题[1]Caspase酶是一组特异性的天门冬氨酸-半胱氨酸蛋白酶,在阶梯式的瀑布反应中被依次激活,在细胞凋亡中充当核心角色。Caspase-3是Caspase家族中最重要的凋亡执行者。我们在体外观察了As2O3对16例ALL患者原代白血病细胞的作用,现报道如下:
1资料与方法
初治ALL16例均为我院住院患者,其中男14例,女2例,年龄7-77岁,中位年龄28岁。采用VDLP(长春新碱、柔红霉素、门冬酰胺酶、泼尼松)或VDCP(长春新碱、柔红霉素、环磷酰胺、泼尼松)方案;以化疗2个疗程后的骨髓缓解(BMR)作为临床疗效判断的指标。
(BMMNC)悬液的配制
无菌抽取肝素(50U/ml)抗凝骨髓3ml,按常规密度梯度离心分离BMMNC,计数有核细胞,并以RPMI1640调整细胞浓度至2×107个/ml,用台盼兰拒染试验法测定细胞存活率95%。
含有体积分数为10%灭活新生小牛血清、10%5U/ml的胰岛素的RPMI1640培养基,BMMNC的终浓度为2×106个/ml,分别设对照组(未加药组)、实验组()。每组均设三复孔,每孔2ml接种于24孔培养板,置于5%CO2、37℃、饱和湿度恒温培养箱中培养48h。每孔加入MTT10μl继续培养4h,弃上清,加入二甲亚砜(DMSO)150μl,平板振荡器振荡5min后,于酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。细胞存活率以下公式计算:细胞存活率(LCS)=(OD实-OD空)/(OD对-OD空)×100%。
2结果
:As2O3作用48h后的ALL原代白血病细胞瑞氏染色在光学显微镜下观察部分细胞出现典型的凋亡特征,染色质浓缩,细胞膜出泡及凋亡小体形成等。
:通过DNA琼酯糖凝胶电泳发现As2O3作用48h后ALL原代白血病细胞DNA出现了特征性“阶梯形”条带。
:应用流式细胞仪进行细胞DNA含量分析发现ALL原代白血病细胞经As2O3作用48h,出现了亚二倍体峰,即细胞凋亡峰。
-3诱导ALL原代细胞凋亡