文档介绍：CpG ODN对哮喘气道MMP
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
[摘要]目的:探讨非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤的寡核苷酸链(CpG ODN)对哮喘气道重塑和气道基质金属蛋白酶 9(MMP9)表达的影响。方法:以卵蛋白致敏激发的小鼠慢性哮喘模型为对象,观察对照组、哮喘组、CpG ODN组及地塞米松组之间支气管壁厚度改变及气道MMP9表达。结果:(1) CpG ODN组和地塞米松组的支气管壁厚度大于对照组而小于哮喘组(P<),而CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异(P>);(2) CpG ODN组和地塞米松组MMP9表达高于对照组(P<)而小于哮喘组(P<),CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异(P>)。结论:慢性哮喘小鼠气道壁明显增厚,而早期行CpG ODN干预则可抑制肺内MMP9的表达而减轻气道重塑。
[关键词]哮喘;气道重塑;寡核苷酸链;基质金属蛋白酶 9
现在研究认为哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,反复炎症刺激可引起组织损伤及后续的组织结构改变即气道重塑[1]。炎症细胞及局部结构细胞如平滑肌细胞、上皮细胞等均可分泌大量介质,诱导细胞外基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达,这些表达在哮喘的慢性病程中起重要作用[2]。含非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤的寡核苷酸链(CpGoligodeoxynuleotides, CpG ODN)能够刺激机体产生多种细胞因子及表面粘附分子,诱导细胞及体液免疫,在治疗免疫性疾病、肿瘤及疫苗研究等方面有独特价值。本实验旨在利用卵蛋白致敏激发的小鼠慢性哮喘模型,探讨CpG ODN对气道重塑有无抑制作用。
1 材料与方法
实验动物及试剂清洁级BALB/c小鼠28只, 7周龄,体重16~20g,购于扬州大学比较医学中心[许可证号:SCXK(苏)20020009]。主要试剂包括鸡卵清蛋白(ovalbumin, OVA)(Sigma公司Ⅱ级),CpG ODN(5′TGACGTT3′)(上海生物工程技术服务有限公司),兔抗基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)多克隆抗体(Santa Cruz公司),二抗试剂盒,3,3二氨基苯联胺(DAB),苏木素(北京中杉生物技术有限公司)。
实验方法
动物分组将28只小鼠随机分为哮喘组、CpG ODN组、地塞米松组和对照组4组,每组7只。
哮喘动物模型制备小鼠于我校动物试验中心[使用许可证号:SYXK(苏)20020130]适应性饲养,温度22~27℃,湿度40%,灯光照明明暗各12h。1周后,采用卵蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠模型[3]。哮喘组、CpG ODN组、地塞米松组分别于第0、,同时CpG ODN组给予CpG ODN100μg。%OVA雾化激发,30mind-1,3d周-1,共6周;%地塞米松雾化10min;对照组全部以生理盐水代替。末次刺激后24h处死动物。
取材将动物颈椎脱臼处死,迅速打开胸腔,取出左肺投入10%中性福尔马林溶液中固定24h。肺标本严格于垂