文档介绍：IL-1β对人晶体上皮细胞中NO和iNOS活性的影响
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【关键词】白细胞介素-1β;一氧化氮;诱导型一氧化氮合酶;人晶体上皮细胞;白内障
白内障是常见多发的眼科疾病,也是视力障碍和致盲的重要眼病之一,现代白内障囊外摘除联合人工晶体植入术是目前最有效的治疗方法。但白内障囊外摘出术后的后囊膜混浊(后发障,posterior capsule opacification,PCO)发病率高,影响视力。在研究PCO的形成机制中,人们发现PCO是因残留的HLEC增生、迁移、分化、合成分泌细胞外基质,并逐渐纤维化,导致后囊膜增殖性改变,以及术后创伤和炎症反应而形成的。IL-1β是一种单核因子,能诱导晶状体上皮细胞的生物反应[1] 。具有广泛的免疫调节作用,并有致热和介导炎症的作用,它的生物学功能是通过与相应高亲和力受体结合而介导的。经实验研究表明,IL-1β在白内障术后早期房水中的含量明显增高,有促进晶状体上皮细胞增殖和分化的作用[2] 。NO是一种自由基性质的气体,易溶于水和脂肪,可在细胞内外自由弥散,在生物体内可作为介质、信使或细胞功能调节因子而参与机体的许多生物活动和病理过程。诱导型一氧化氮合酶(inducible NO synthase,iNOS)是体内催化NO合成的酶。人的视网膜、葡萄膜、睫状肌和房水通道中有iNOS的分布[3] 。有报道认为,IL-1
β可能是iNOS的诱导剂,但有关IL-1β诱导的iNOS在晶状体的表达情况却鲜有报道。本文旨在探讨NO和iNOS在IL-1β诱导的PCO形成中的作用,为进一步阐明PCO的发病机制提供可能的相关线索。
1 材料与方法
主要仪器 CO 2 培养箱(NAPCO5410);超净工作台(苏州净化设备厂);倒置相差显微镜(OLYM-PUS IMT-2);超声波细胞破碎机( UO2000H);低温离心机(HERMLEZ283K)。
主要试剂 DMEM培养基,小牛血清(GIB-CO公司);IL-1β(Sigma公司);iNOS试剂盒(南京建成生物工程研究所);MTT试剂(美国Fluka);Griess试剂(Promega公司);
方法
HLEC HLEC以含10%胎牛血清(FBS)与100mg/ml青霉素和100mg/ml链霉素的DMEM培养液培养及传代,以1
×10 5 /ml的密度接种于培养皿中,细胞80%以上融合后,换无血清DMEM培养用于实验。
MTT实验借助酶标仪测定反映增殖作用大小的光密度(OD)值:将细胞消化后调整细胞浓度,将100μl晶体上皮细胞以1×10 5 /ml的密度接种于96孔培养板中,,,,,-1β100μl,在37℃孵育24h后,弃上清,PBS冲洗两遍,每孔加入100μl MTT溶液(5g/L),继续孵育4h,每孔加100μl二甲基亚砜,振荡10min后,用酶标仪于570nm处测定OD值。以不加入IL-1β的作为对照。
NO水平的测定根据Griess反应原理,测定细胞培养上清液