文档介绍：p73基因多态性及蛋白表达与结直肠肿瘤关系的研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】目的探讨p73基因的多态性及蛋白表达与结直肠肿瘤发生风险的关系。方法血液标本分为3组,包括结直肠腺癌组、结肠腺瘤组、结肠未见明显异常组,各60例。采用PCRRFLP方法检测血液标本p73基因多态性。组织标本分3组,分别取自结直肠腺癌病灶处、结肠腺瘤病灶处、结直肠腺癌患者的相应远离癌灶的正常黏膜组织,各30例,采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中p73蛋白表达情况。结果(1)p73基因多态性与结直肠腺癌、腺瘤的发生有相关性,且AT/AT基因型的人群易患结肠肿瘤。(2)p73蛋白表达与结直肠腺癌的发生、发展有相关性。结论 p73基因多态性与结直肠癌的发生有相关性,且AT/AT基因型的人群易患结肠肿瘤。p73蛋白表达的增加或上调与结直肠癌相关。
【关键词】结直肠肿瘤; 基因,肿瘤抑制; 肿瘤抑制蛋白质类; 多态现象,遗传
结直肠癌的发生是黏膜上皮受到遗传和环境等多种因素作用、导致多基因改变及相互作用的结果。已知p53基因是人类肿瘤中的重要抑癌基因,而p73基因作为p53家族的成员,在人类肿瘤中也起着重要作用。现已确定TAp73与p53类似,也能诱导不可逆的细胞周期停滞、促进细胞凋亡,并且此功能与TAp73激活p53靶基因如Bax、p2l waf1等的转录有关[1]。p73基因包含一个多态性,在上游起始子AUG外显子,理论上可能形成茎
环结构,被认为可以改变基因表达从而影响p73结构。笔者通过研究p73蛋白在结肠腺癌组织、腺瘤组织及正常组织的表达水平,探讨其与结肠腺癌的细胞分化程度以及肿瘤发生发展的关系。
1 对象和方法
对象所有病例均来自福建省立医院内镜检查和外科手术治疗患者,其中结直肠癌主要指散发型,排除遗传性非息肉病性大肠癌()。详细记录病人性别、年龄及结直肠肿瘤易感因素,如家族史、手术史、饮食等。血液标本分为3组,包括腺癌组60例,腺瘤组60例,未见明显异常组60例。组织标本分为3组,分别取自结直肠腺癌病灶处30例,结肠腺瘤病灶处30例,结直肠腺癌患者的相应远离癌灶的正常黏膜组织30例。所有腺癌或腺瘤均经过内镜形态学及病理组织学证实。“结肠未见异常”为内镜形态学上结肠黏膜光滑的受检者。所有组织标本均为10%甲醛溶液固定、石蜡包埋。
方法
PCRRFLP 取外周血2 mL,用EDTA抗凝,基因组DNA提取试剂盒(TaKaRa D9081)进行基因组DNA提取,聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR
RFLP)。PCR引物(228 bp):

上游:5’CAGGAGGACAGAGCACGAG3’

下游:5’CGAAGGTGGCTGAGGCTAG3’
PCR循环参数:95 ℃变性5 min,95 ℃ 30 s→57 ℃ 45 s→72 ℃ 30 s,进行35个循环,最后72 ℃延伸10 min。PCR产物中加入1 μL限制性内切酶Sty1,37 ℃孵育酶切7~8 h,产物用2%琼脂糖胶电泳,结果用凝胶成像系统分析。
免疫组织化学染色采用二步法免疫组织化学染色。p73蛋白阳性物质定位于细胞核,