文档介绍：STAT3基因在骨肉瘤组织中的表达及临床意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】目的:探讨信号转导与转录激活因子3( signal transducerand activator of transcription 3,STAT3)基因在骨肉瘤组织中的表达及临床意义。方法:将武汉市四大三级甲医院收集的骨肉瘤20例及良性骨软骨瘤5例标本,应用免疫组织化学方法检测各组组织中STAT3基因的表达水平, 采用HPIAS1000图文报告管理系统对STAT3基因的表达进行定量分析,、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果:STAT3基因在骨肉瘤组织中呈高表达, STAT3基因在良性骨软骨瘤组织中呈低表达, STAT3基因在骨肉瘤组织中的表达与良性骨软骨瘤组织的表达比较差异有显著性()。结论:STAT3基因在骨肉瘤的分子发病机制中可能起了重要的作用,并可作为判断骨肉瘤患者预后的参考指标之一。
【关键词】骨肉瘤; STAT3癌基因; 免疫组织化学
骨肉瘤是最常见的骨原发恶性肿瘤。美国每年约诊断900例骨肉瘤,中国骨肉瘤发病率在原发恶性肿瘤中居首位,~,多发于10~20岁的青少年的长骨,尤以股骨下段和胫骨上段多见[1]。骨肉瘤早期临床症状无特异性,且病情进展较快,大多数病例就诊时已经进入临床ⅡB期。这些患者中有相当一部分会出现肺转移,肺转移是其主要死亡原因,80%的病例在确诊时已有肺部微小转移灶[2~4]。
信号转导和转录活化因子(signal transducers and activators of transcription, STATs)家族是一种存在于胞浆并在激活后能够转入核内与DNA结合的蛋白家族,具有信号转导和转录调控双重功能[5]。STATs蛋白广泛表达于机体不同类型的细胞和组织中,参与细胞生长、分化、凋亡等多种生理功能的调控,并与炎症、肿瘤和免疫反应关系密切。STATs家族成员中,STAT3与肿瘤的关系最为密切[6~7]。
本研究通过应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测骨肉瘤及良性骨软骨瘤组织中STAT3的表达水平,探讨STAT3在骨肉瘤发生、发展过程中的作用机制,为临床上防治骨肉瘤提供理论依据。
1 材料和方法
材料
材料来源及分组收集武汉市四大三级甲医院病理科2000~2008年骨肉瘤存档蜡块20例及良性骨软骨瘤存档蜡块5例。所有切片经病理学专家诊断为骨肉瘤及良性骨软骨瘤。
材料采用免疫组织化学SP法检测STAT3基因在骨肉瘤与良性骨软骨瘤组织中的表达。
主要试剂和仪器
主要试剂 STAT3兔抗人多克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司);DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。
主要仪器 YWY781型医用微波仪,250 W,50 Hz (浙江临安电子器材厂生产);家用高压锅;电热恒温干燥箱(湖北黄石医疗器械厂生产);显微镜成像系统(Olympus公司)。
方法
蜡块切片厚5μm,贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上,置于烤箱烤干待用。
免疫组织化学SP法检测STAT3相关抗原
具体步骤:
① 4μm组织切片常规脱蜡至水后, PBS(pH )漂洗3×3 min;
②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法),室温自然冷却后, PBS(pH )漂洗5×3 min;
③滴加3%过氧化氢,37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性, PBS(pH )漂洗3×3 min;
④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;
⑤甩去多余血清,分别滴加一抗,4℃孵育过夜, PBS(pH )漂洗3×5 min;
⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min, PBS(pH )漂洗3×3 min;
⑦滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min, PBS(pH )漂洗3×3 min;
⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色,光镜下控制反应时间(约3~5 min),自来水冲洗终止反应;
⑨苏木素复染,流水冲洗,1%盐酸酒精分色数秒,流水冲洗,%氨水返蓝;
⑩梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片并镜检;
用PBS代替一抗作为阴性对照组,购买的阳性片作为阳性对照组。
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