文档介绍：大肠癌与乳糖酶基因C/T-13910单核苷酸多态性相关性分析
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:杨春,马晓强,何兰杰,张东,王立斌,杨银学
【摘要】为探讨大肠癌与乳糖酶基因单核苷酸多态性的关系,利用聚合酶链式反应-限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,检测100例大肠癌患者及106例健康对照组乳糖酶基因C/T-13910位点的单核苷酸多态性,计算并比较各组基因型和等位基因频率,探讨二者之间的相关性。结果100例大肠癌患者及106例健康对照的基因型均为C/C型,病例组与健康对照组基因型相同。本研究尚未发现乳糖酶基因C/T-13910单核苷酸多态性与宁夏及周边地区人口大肠癌的发生有相关性。
【关键词】乳糖酶;大肠癌;单核苷酸多态性;乳糖不耐受
目前,大肠癌在我国的发病呈上升趋势,对其发病原因的研究也在不断深入,有研究提示乳糖酶缺乏与大肠癌的发生发展有关[1]。本文通过聚合酶链式反应-限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,初步探讨宁夏及周边地区人群大肠癌与乳糖酶基因C/T-13910单核苷酸多态性的相关性,以期能在大肠癌的病因学方面有新的发现,为进一步预防和治疗该疾病提供依据。
1 材料与方法
1. 1 试剂和仪器
DNA提取试剂盒,购自北京赛百盛基因技术有限公司;根据LCT基因的基因序列设计并由北京赛百盛基因技术有限公司合成PCR扩增引物,上游引物:5’-TTT GTT GCA TGT TTT TAA TCT TTG GTA TGG G-3’,下游引物:① 5’-AGG AGA T TTT GAG GCC AGG G-3’;②5’-AGG AGA T TTG A GGT-3’;Taq酶、dNTPs 、DNA Marker B、 Rsa Ⅰ内切酶、Gold ViewTM染色剂均购自北京赛百盛基因技术有限公司;PCR扩增仪(美国BIO-RAD公司生产);DYCZ-24R双垂直电泳仪(北京市六一仪器厂生产);Gel Doc 2000凝胶图像分析系统(美国BIO-RAD公司生产)。
1. 2 研究对象
1. 2. 1 病例组
2005年7月—2006年10月,宁夏医学院附属医院肛肠外科收治的100例大肠癌,均经病理学证实临床诊断。其中男51例,女49例,男女之比为1. 43∶1,年龄16~86岁。出生和长期生活在宁夏地区71列,周边地区29例,有三代以上回族血统9例,汉族91例。
1. 2. 2 对照组
近期无腹泻史及脓血便史,无消化道疾病史,无肠道手术史的前来宁夏医学院附属医院做健康体检者及本院健康职工共106人,年龄21~65岁,出生和长期生活在宁夏地区72例,周边地区34例,有三代以上回族血统36例,汉族70例。所有研究对象均按知情同意原则签署协议书。
1. 3 方法
1. 3. 1 模板DNA的提取
按DNA提取试剂盒说明书的步骤进行。提取的DNA置-20℃冰箱保存备用。
1. 3. 2 PCR扩增
取200μL薄壁管,加入反应体系(50μL),进行第一步PCR循环,再以第一步PCR扩增产物为模板,加入反应体系,更换下游引物②,进行第二步PCR循环。两次PCR扩增的片断均为307bp。
1. 3. 3 酶