Vimentin、CK34βE12在前列腺增生组织中表达的研究.doc

文档介绍：Vimentin、CK34βE12在前列腺增生组织中表达的研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:王艳宁,韩起鹏,王嘉伦
【关键词】前列腺增生;前列腺炎;CK34βE12;Vimentin
前列腺增生(benign prostatic hypertrophy,BPH)是男性常见的疾病之一,其发病原因多是以年龄及激素为主。但近年的一些研究发现,在前列腺增生症手术切除的标本中经常发现有炎症的浸润,但对于两者之间的关系目前报道的不多。我们利用免疫组织化学方法研究CK34βE12与Vimentin在BPH组织中的表达,旨在探讨炎症与BPH的关系。

1 材料和方法

研究对象 BPH组织标本为中国医科大学和解放军沈阳第202医院2005年4月至11月手术摘除(耻骨上经膀胱途径)的增生前列腺共55例,标本取自于膀胱颈至精阜尾端连线的中点处,均经病理检查诊断为BPH。患者年龄61~85岁,;~ 3 , 3 ;国际前列腺症状评分(IPSS)14~34分,。正常前列腺标本为2005年3月至2006年10月因意外死亡的青年男性尸检前列腺标本,共4例,年龄为26~32岁,平均29岁,均经组织学检查证实为无病理改变。

主要试剂和来源一抗为鼠抗人CK34βE12单克隆抗体(1∶100)、鼠抗人Vimentin单克隆抗体(1∶100),均购于北京中杉生物试剂公司,二抗为兔抗鼠IgG(Zymed Laboratories Inc.)。S-P超敏免疫组织化学试剂盒(Kit-9706)购自福州迈新生物技术有限公司,DAB酶底物显色试剂盒(ZLI-9032)购于北京中杉生物技术有限公司。
实验方法

HE染色石蜡标本4μm连续切片,60℃烤片2h。二甲苯脱蜡,经梯度酒精脱水,苏木素染色,清洗,盐酸酒精分化,返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。

免疫组织化学方法检测采用链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(即S-P法)。染色方法:(1)脱蜡和水化;(2)微波抗原修复;(3)内源性过氧化物酶阻断溶液室温下孵育15min;(4)非免疫性动物血清室温下孵育15min;(5)第一抗体4℃下孵育过夜,一抗稀释比为:CK34βE12(1∶100)、Vimentin(1∶100);(6)生物素标记的第二抗体室温下孵育20min;(7)链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液室温下孵育20min;(8)新配制的DAB溶液显色;(9)苏木素复染,中性树胶封片。 PBS缓冲液(pH=)冲洗5min×3次。同时用已知阳性片作阳性对照,用PBS代替一抗作阴性对照。
结果判定每张切片随机选取5个视野,每个视野计数100个细胞,计算阳性细胞的百分比,以细胞胞浆出现棕色颗粒为阳性表达。按着色细胞百分数记分,小于20%为0分;20%~50%为1分;大于50%为2分。按着色强度记分,无着色为0分;浅棕色为1分;深棕色为2分。将着色细胞百分数记分与着色强度记分相乘,总记分0分为阴性(