文档介绍：阿托伐他汀对Livin、NFκB与IL1β在脑缺血再灌注大鼠脑组织中表达的影响
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【摘要】目的检测脑缺血再灌注大鼠脑组织Livin、NFκB和白介素(IL)1β表达及观察阿托伐他汀对其表达的影响,探讨阿托伐他汀对脑缺血再灌注后的脑保护作用机制。方法大脑中动脉线栓方法制作大鼠脑缺血再灌注模型;实验大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)及阿托伐他汀治疗组(MT组);免疫印迹法和RTPCR检测大鼠脑组织Livin、NFκB和IL1β的表达,TTC染色法测量脑梗死体积。结果梗死灶体积MT组较M组显著降低(), 较S组显著增高();MT组NFκB和IL1β表达较M组降低(),MT组Livin表达较M组增高();MT组Livin、NFκB和IL1β表达较S组增高();M组Livin、NFκB和IL1β表达较S组显著增高()。结论阿托伐他汀可以通过降低脑缺血再灌注大鼠脑组织NFκB和IL1β、增强Livin表达抑制细胞凋亡和脑内炎症发挥脑保护作用。
【关键词】脑缺血再灌注;阿托伐他汀;细胞凋亡;炎症
NF
κB是一种广泛存在于真核细胞中的转录因子,现已证实脑缺血损伤可使NFκB激活,NFκB直接或间接地参与脑缺血损伤机制过程。他汀类药物(statins)即3羟基3甲基戊二酸单酰辅酶A(HMGCoA)还原酶抑制剂,是一类强效降胆固醇药物,该类药物除能明显调节血脂外,还具有多向性抗动脉粥样硬化作用,在心脑血管疾病的防治方面有着广泛的作用〔1~3〕。他汀类药物不但可以减少脑卒中的发生,而且还可以改善脑卒中患者的临床预后。本实验采用阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注进行治疗干预,观察其对大鼠脑组织炎症因子IL1β、抗凋亡因子Livin和NFκB表达的影响,探讨阿托伐他汀的脑保护作用机制。
1 材料与方法

动物及分组
Wistar大鼠30只,雌性,体质量200~250 g,第三军医大学野战医院动物研究所提供,动物中心许可证号:渝实动设施准第260号。Wistar大鼠适应性喂养1 w,经筛选,大鼠按抓取随机原则分为5组,即假手术组(S组),阿托伐他汀治疗组(MT组,分为缺血再灌注12和24 h),缺血再灌注组(M组,分为缺血再灌注12和24 h组),每组6只。
主要试剂及设备
阿托伐他汀钙片由北京红惠生物制药股份有限公司生产(生产日期为2005年9月2日,生产批号0500934,剂量20 mg/片);白介素(IL)
1β、Livin和NFκB试剂盒为北京搏奥森生物科技有限公司产品;TTC为Sigma产品。
动物模型制作方法
参照文献〔4〕描述的大脑中动脉线栓方法制作大鼠脑缺血再灌注模型。动物苏醒后参考Longa等〔5〕的5分评分法,2分或2分以上者入选本实验。
给药方法
将阿托伐他汀用生理盐水稀释成 mg/ml浓度备用。~ cm线栓,予以等量的生理盐水灌胃;MT组在M组的基础上,于缺血后120 min及14 h分别给予阿托伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃;M组行缺血和再灌注处理并予以等量的生理盐水灌胃。阿托伐他汀的剂量选择参考文献〔2,6〕。
脑梗死体积检测
每组随机取大鼠5只,经过量麻醉后断头取脑,经速冻20 min后。从视交叉向后连续冠状切片,片厚2 mm。将脑片放入2%TTC溶液,37℃温箱中染色30 min,15 min翻面,甲醛固定24 h后,见正常脑组织呈红色,梗死灶则为白色。用数码相机拍照,OSIRIS图像处理软件计算各脑片右侧半脑梗死灶百分比(梗死面积/总面积),梗死体积=各层梗死面积之和×层面厚度,计算平均值。
免疫印迹实验
按10 ml/g的比例加入全细胞裂解液,组织经匀浆、超声破碎后,用BCA法进行蛋白定量。10%的SDS
PAGE凝胶电泳,上样量为28 μg。电泳条件:4℃。电流20~30 mA。电泳结束后,进行蛋白质转膜。转膜条件: m的硝酸纤维素膜(NC),4℃,电流400 mA,转膜3 h。Western印迹杂交步骤如下:10%脱脂牛奶封闭NC膜1 h,TYBS(20 mmol/L TrisHCl,pH ; mmol/L Nacl;%Tween 20)漂洗3次,每次10 min,然后室温下与APP一抗(1∶3 000)杂交反应3 h,TTBS漂洗同前。再将NC膜与辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗(1∶5 000)杂交反应1