文档介绍：艾司洛尔对心室肌细胞动作电位及L型钙离子通道的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:鲁洋李淑梅张文杰张小昊
【摘要】目的观察艾司洛尔对豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)和L型钙离子通道的影响。方法 Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组和艾司洛尔(50 μmol/L和100 μmol/L)组。应用全细胞电流钳模式记录心室肌细胞AP,应用电压钳模式记录L型钙离子通道电流(ICaL)。结果艾司洛尔(100 μmol/L )可使心肌细胞AP时程APD20、APD50明显缩短(),心室肌细胞ICaL峰值电流明显降低()。结论艾司洛尔缩短心室肌细胞AP时程和抑制钙通道可能是其抑制交感风暴的机制之一。
【关键词】艾司洛尔;心肌细胞学;动作电位;钙通道,L型
交感风暴是指24 h内发作2次或2次以上的室速或室颤。其发生的根本原因是交感神经的过度兴奋,导致室速和室颤反复发作,需要反复多次的电复律。近年发现β受体阻滞剂不仅对室上性心律失常有效,还能有效抑制交感风暴引起的反复室速、室颤〔1〕。艾司洛尔(Esmolol) 为超短效、具有心脏选择性的
β1 受体阻滞剂,对各种室上性心律失常都有显著疗效,具有半衰期短、清除率高、起效迅速、无蓄积作用等优点〔2,3〕,但对心室肌细胞离子通道的作用机制国内尚无报道。本研究旨在探讨艾司洛尔对心肌细胞离子通道的作用机制。
1 材料与方法
动物、药品与仪器雌性豚鼠,体重300~350 g,吉林大学实验动物中心提供。艾司洛尔由齐鲁制药厂提供,国药准字(1999) X231 (1) 号。CEZ2400型膜片钳放大器为日本产品。
单细胞动作电位(AP)的记录方法应用胶原酶常规分离豚鼠心室肌细胞〔4〕。将尖端直径范围为1~ μm的微电极抛光后冲灌电极液,电阻为2~5 MΩ。将已加正压的微电极缓慢插入浴液,直至接触心肌细胞,去除正压,用注射器抽吸以形成10~20 cmH2O的负压。当电极尖端与细胞膜表面形成1~5 GΩ封接电阻时,用力吸破电极尖端上的膜片,形成全细胞记录。应用电流钳方法,给予时程10 ms、1次/s、幅度为1~2 nA的电流脉冲,引导出豚鼠心室肌细胞的AP,并输入计算机分析AP的幅度(action potential amplitude,APA)、静息电位(resting potential,RP)及动作电位复极20%、50%、90%时程(action potential duration,APD20、APD50、APD90)各项指标。
全细胞钙通道电流的记录方法〔4〕玻璃微电极冲灌电极液后,在细胞外液中电极电阻为 2 ~ 5 MΩ。电极形成1 GΩ以上高阻封接后,吸破电极尖端下的细胞膜片,形成全细胞记录方式。应用电压钳方式,将保持电压设置在-50 mV,命令电压从-50~+60 mV,阶跃10 mV,持续时间300 ms,记录到不同钳制电压下的L
型钙通道电流(ICaL), 软件采集、分析和处理数据。
记录AP及ICaL电流所需溶液记录AP所用灌流液(mmol/L):NaCl 137,