文档介绍：大鼠重症肌无力中枢损害时c┐fos基因表达
【关键词】重症肌无力
关键词: 重症肌无力;受体,胆碱能;抗体;基因,Fos;中枢神经系统
摘要:目的探讨重症肌无力(MG)S)损害机制. 方法从AChRab阳性的全身型MG患者血清中提取纯化IgG,然后注入大鼠侧脑室,应用免疫组织化学方法,观察即早基因c-fos的表达. 结果脑室内注入AChRab后,大鼠皮层、海马、下丘脑等部位出现显著的Fos表达. 结论 c-、海马、下丘脑等部的神经元极可能涉及MG中枢损害时的病理生理过程.
Keywords:myasthenia gravis;receptors,cholinergic;anti-bodies;genes,Fos;central nervous system;rats
Abstract:AIM To explore the mechanism of central ner-vous S)dysfunction in myasthenia gravis(MG).METHODS c-fos expression was investigated in S neurons by immunohistochemical method following intracere-broventricular administration of IgG purified from MG pa-tient Strong expression of Fos was found in the cerebral cortex,hippocampus,hypothalamus et al after intracerebroventricular administration of IgG(AChab).CONCLUSION It is concluded that c-fos may be related to the mechanism S dysfunction in MG.
0 引言
重症肌无力(MG)主要的致病机制是患者体内存在的乙酰胆碱受体抗体(AChRab)与神经肌肉接头(NMJ)处的乙酰胆碱受体(AChR)结合,而引起NMJ处乙酰胆碱(ACh)传递障碍[1] ,,,S)的异常,如锥体束征、癫痫、精神症状、记忆认知障碍[1-7] 及脑电图及脑干诱发电位异常[8-10] .Brenner等将从MG患者血清中提取的IgG注入大鼠侧脑室,发现其不仅影响下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能,而且还出现MG模型样症状[11] .此外,Lefvert等的研究表明,MG患者脑脊液中存在AChRab[12] .S功能异常,,作者用MG患者AChab进行免疫组化研究发现,S神经-AChR免疫交叉结合[13] .本项研究,以能够反映神经元功能变化的原癌基因c-fos的表达作为神经元兴奋的指标,观察其在大鼠MG中枢损害时的变化,S受损的证据.
1 材料和方法
实验动物用成年雄性SD大鼠24只,体质量200~250g,(由本校实验动物中心提供),安静数天,给予充足、清洁的饮水,,对照组10只.
提取IgG 选择具有典型MG临床症状,,,提取IgG,方法同上,作为对照.
大鼠脑室内注射IgG 选成年SD大鼠14只,用10g L-1 戊巴比妥钠经腹腔麻醉(30~40mg kg-1 体质量),固定于立体定向仪上,切开颅顶皮肤,,,,缓慢注入25uL MG患者IgG,隔日1次,,,如摄食、体质量、四肢运动、呼吸频率及动度等.
组织准备第三次注射IgG后5h,用10g L-1戊巴比妥钠经腹腔麻醉SD大鼠,经主动脉灌注40g L-1 多聚甲醛固定;取脑组织,置于200g L-1 蔗糖溶液中过夜;冰冻切片,片厚40nm.
图1 - 图6 略
免疫组织化学先用PBS洗切片,10min×3次,入含3g L-1 TritonX-100的PBS中,室温下30min,然后入Fos抗体(