文档介绍：miR-375调控肝癌细胞能量代谢的作用 及分子机制研究
*本研究得到国家自然科学基金(编号:81201549)资助。
答辩人:许鑫森
专业:临床医学(七年制)
导师:刘昌教授
硕士研究生答辩
1
研究背景
2
研究目的
3
研究方法
4
研究结果
5
结果讨论
6
结论与展望
答辩内容
肝癌细胞作为生长增殖失控的细胞,其重要的生物学标志是能量代谢异常。
以糖酵解水平增强为主要表现(即“Warburg effect”)的糖代谢通路异常是其中的核心环节。
Warburg效应的发现,将肿瘤特有代谢异常问题提到了重要地位。该现象目前被认为是肿瘤细胞恶性转化中的基础代谢改变,并被应用于肝癌的临床诊断和靶向治疗
1 研究背景-Warburg effect
1 课题背景-miRNA
microRNA作为影响基因转录后翻译的重要因子,具有调控肿瘤细胞代谢的重要功能。
1 研究背景-miRNA
基于这一思路,本论文拟通过生物信息学筛选和分子生物学实验,探讨线粒体相关miRNA对于肝癌代谢的影响。
目前报道的肿瘤能量代谢相关miRNAs仅数十个
能量代谢作为一个巨大的调控网络,现有报道能否充分解释其复杂的调控机制?
尤其是在线粒体能量代谢的调控过程中,是否需要更多的miRNA参与?
2 研究目的
细胞恶变的能量基础
3 研究方法
生物信息学筛选
miR-375表达调控
靶点预测
基因芯片分析
96对肝癌组织标本芯片
----数据从GEO网站获取
miR-375细胞转染
靶基因预测数据库
----miRanda、miRDB、miRWalk、Targetscan
Affymetrix表达谱芯片
Real-time PCR、BCA蛋白定量、葡萄糖乳酸检测、MTT检测、线粒体DNA拷贝数检测、线粒体荧光探针
通过96对肝癌组织标本芯片筛选出5个与线粒体代谢功能相关且在肝癌中差异表达的候选miRNAs
miRNA名称
基因定位
肝癌中表达情况
(肝癌/正常)
MNEGs中被证实靶基因数目a
miRNA与MNEGs的相关性
NCI-60
肝癌标本
miR-375
2q35
6
<
miR-200b
2
<
miR -188
1
<
miR -18a
1
<
miR -96
2
调控肝癌代谢的潜在miRNAs
4 研究结果-筛选miRNAs
miR-375与MNEGs和Genome的相关系数
调控肝癌代谢的潜在miRNAs
4 研究结果-筛选miRNAs
miRNA-375最早由Poy MN等于2004年在Nature杂志报道。随后的研究表明,miRNA-375与2型糖尿病以及胰岛素耐受相关,并能够影响胰岛细胞的发育和调控胰岛素的释放,参与全身糖代谢水平的调控。
对7种肝癌细胞系进行miR-375表达检测
正常组织与肿瘤组织
4 研究结果-miR-375的RT-PCR验证
实时定量PCR
转染细胞组中miR-375表达水平显著上调
RNA浓度
琼脂糖凝胶电泳
4 研究结果-细胞转染