文档介绍：miR-375 调控肝癌细胞能量代谢的作用及分子机制研究*本研究得到国家自然科学基金(编号: 81201549 )资助。*本研究得到国家自然科学基金(编号: 81201549 )资助。答辩人:许鑫森专业:临床医学(七年制) 导师:刘昌教授硕士研究生答辩 1 1 研究背景 2 2 研究目的 3 3 研究方法 4 4 研究结果 5 5 结果讨论 6 6 结论与展望答辩内容肝癌细胞作为生长增殖失控的细胞,其重要的生物学标志是能量代谢异常。以糖酵解水平增强为主要表现(即“ Warburg effect ”)的糖代谢通路异常是其中的核心环节。 Warburg 效应的发现,将肿瘤特有代谢异常问题提到了重要地位。该现象目前被认为是肿瘤细胞恶性转化中的基础代谢改变,并被应用于肝癌的临床诊断和靶向治疗 1研究背景-Warburg effect 1 课题背景-miRNA microRNA 作为影响基因转录后翻译的重要因子,具有调控肿瘤细胞代谢的重要功能。 1研究背景-miRNA 基于这一思路,本论文拟通过生物信息学筛选和分子生物学实验,探讨线粒体相关 miRNA 对于肝癌代谢的影响。目前报道的肿瘤能量代谢相关 miRNAs 仅数十个?能量代谢作为一个巨大的调控网络,现有报道能否充分解释其复杂的调控机制? ?尤其是在线粒体能量代谢的调控过程中,是否需要更多的 miRNA 参与? 2研究目的细胞恶变的能量基础 3研究方法 96 对肝癌组织标本芯片---- 数据从 GEO 网站获取 miR-375 细胞转染靶基因预测数据库----miRanda 、 miRDB 、 miRWalk 、 Targetscan Affymetrix 表达谱芯片 Real-time PCR 、 BCA 蛋白定量、葡萄糖乳酸检测、 MTT 检测、线粒体 DNA 拷贝数检测、线粒体荧光探针通过 96 对肝癌组织标本芯片筛选出 5 个与线粒体代谢功能相关且在肝癌中差异表达的候选 miRNAs miRNA 名称基因定位肝癌中表达情况(肝癌/正常) MNEGs 中被证实靶基因数目 a miRNA 与 MNEGs 的相关性 NCI-60 肝癌标本 miR-375 2q35 6 < miR-200b 2 < miR -188 1 < miR -18a 1 < miR -96 2 调控肝癌代谢的潜在 miRNAs 4 研究结果-筛选 miRNAs miR-375 与 MNEGs 和 Genome 的相关系数调控肝癌代谢的潜在 miRNAs 4 研究结果-筛选 miRNAs miRNA-375 最早由 Poy MN 等于 2004 年在 Nature 杂志报道。随后的研究表明, miRNA-375 与2 型糖尿病以及胰岛素耐受相关,并能够影响胰岛细胞的发育和调控胰岛素的释放,参与全身糖代谢水平的调控。对7种肝癌细胞系进行 miR-375 表达检测正常组织与肿瘤组织 4 研究结果-miR-375 的 RT-PCR 验证实时定量 PCR 转染细胞组中 miR-375 表达水平显著上调 RNA 浓度琼脂糖凝胶电泳 4 研究结果-细胞转染