文档介绍：贯众中活性组分对金黄色葡萄球菌抑制作用的研究
作者:赵薇程熠李勇李玉珍张俏范洪学刘雅文
【摘要】目的分离贯众中活性组分,并研究其对老年肺部感染金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法采用pH3的95%乙醇进行回流提取,制成粗提液,并以石油醚、乙酸乙酯萃取,纸片法筛选活性部分,低压液相色谱做精分离,根据分离图谱的不同吸收峰位置来收集不同组分。采用三氯化铁+铁氰化钾多酚定性实验和Folin酚法进行组分的总多酚定量,以液体试管稀释法测定不同组分对老年肺部感染患者痰中分离的金黄色葡萄球菌的抑制作用。结果贯众95%乙醇粗提液和乙酸乙酯萃取部分都具有较强的抑制作用,将后者经低压液相色谱分离后共获得13个组分,组分2、3、4、8、9、11、12和13均具有较强的抑菌及杀菌作用,其组分13的抑菌作用最强, μg/ml, μg/ml。结论贯众经乙醇粗提并且乙酸乙酯萃取部分中含有多种活性组分,具有较强的抑制及杀灭金黄色葡球菌作用。
【关键词】贯众;金黄色葡萄球菌;分离;抑菌作用
金黄色葡萄球菌是老年肺部感染的常见菌,亦是院内感染的主要致病菌〔1〕,其感染率占G+菌首位,成为治疗的难点。贯众为鳞毛蕨科多年生草本植物粗茎鳞毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai)、蹄盖蕨科多年生草本植物娥眉蕨(Lunathyrium acrostichoides Ching)、乌毛蕨科多年生草本植物单芽狗脊(Woodwardia unigemmata Nakai)等的根茎及叶柄基部〔2〕,是中医预防瘟病要药。研究证明,贯众具有驱虫、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、止血及子宫收缩作用〔3,4〕。贯众中抗菌抗病毒的主要物质为植物多酚〔5〕。本文旨在探索贯众中活性组分的分离并研究其抑菌作用,为其进一步开发提供实验依据。
1 材料和方法
材料贯众(Dryopteris crassirhizoma Nakai)购于医药公司;金黄色葡萄球菌(us aureus)实验菌株从老年肺部感染患者痰中分离并鉴定为金黄色葡萄球菌;营养肉汤、营养琼脂、MH肉汤等培养基(北京陆桥生物公司);95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯等为分析纯(北京化工厂生产);Folin酚试剂等(北京鼎国生物公司)。
方法
贯众有效成份的提取称取250 g的贯众干品,40目粉碎,以95%乙醇(pH3) L回流提取16 h,收集提取液旋转蒸发回收溶剂并浓缩,得到棕黑色黏稠的粗提物。依次以石油醚和乙酸乙酯萃取,并旋转蒸发回收溶剂并浓缩,形成石油醚萃取部分和乙酸乙酯萃取部分,同时收集每步的剩余水相。滤过除菌,-4
℃保存。
乙酸乙酯萃取部分的液相色谱分离将乙酸乙酯萃取部分用少量50%乙醇溶解,并用低压液相色谱分离系统进行分离制备(分离介质为PhamadexLH20), cm,洗脱液为50%乙醇(pH3)和70%乙醇(pH3)(1∶1)梯度洗脱,洗脱速度为24 ml/h,检测波长280 nm,将收集的液体按吸收峰图谱进行分离,同一个吸收峰的位置的洗脱液收集后并编号,记为一个组分。再以95%乙醇清洗介质并收集洗柱液,旋转蒸发回收乙醇并浓缩,滤过除菌,-20℃保存。
组分中多酚物质的定性分析将样品