文档介绍：兔脂肪源性干细胞在颅骨缺损修复中的应用
作者:张钦,马真胜,刘建,孟国林,张堃,李毅,张志敏
【摘要】目的: 探讨脂肪源性干细胞作为骨组织工程的种子细胞在修复兔颅骨缺损中的应用前景. 方法: 提取兔脂肪源性干细胞,成骨诱导并检测,将成骨诱导前后的脂肪源性干细胞种植到自制松质骨支架上,将细胞支架复合物和单纯支架材料分别移植至兔颅骨缺损部位. 结果: 与未诱导的脂肪源性干细胞复合支架、单纯支架以及空白处理对比,成骨诱导后的脂肪源性干细胞复合支架修复骨缺损面积最大,差异具有统计学意义(P<). 结论: 脂肪源性干细胞可作为骨组织工程的种子细胞,其成骨诱导后与自制松质骨复合植入体内,能显著促进骨缺损的修复.
【关键词】脂肪源性干细胞;异种松质骨;支架材料;骨代用品;生物医学工程;成骨诱导;种子细胞
0引言
如何获得充足的种子细胞是长期以来限制组织工程研究的瓶颈,骨髓基质干细胞尽管已被广泛应用于组织工程研究,但由于其干细胞含量过低、骨髓抽取量有限以及对患者造成的创伤等,使其广泛应用到受限. 2001年
Zuk等[1]从脂肪组织中成功提取了干细胞,并成功诱导其向骨、软骨、脂肪、心肌等多个方向诱导分化. 我们将成骨诱导的脂肪源性干细胞(adiposederived stem cells,ADSCs)与异种松质骨支架复合,移植至兔颅骨缺损部位,以探讨成骨诱导脂肪源性干细胞修复骨缺损的应用前景.
1材料和方法
,4 mo龄,~ kg(第四军医大学实验动物中心);o改良的Eagle培养基(DMEM),胎牛血清(FBS),地塞米松,抗坏血酸,β甘油磷酸钠(美国Sigma公司);碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒(南京建成生物技术有限公司),牛股骨,甲醇,氯仿,300 g/L H2O2等(市售).
[1] mL/kg速眠新麻醉,取颈部后正中3 cm切口,无菌切取肩胛上脂肪组织约2 mL. 清除切取组织中肉眼可见的小血管,去除外包膜和明显的结缔组织,DHanks冲洗3遍以洗去红细胞的污染. 切碎成糊状,加入2 g/LⅠ型胶原酶5 mL,在37℃水浴搅拌消化40 min,过滤,加入两倍体积DMEM培养液(含100 mL/L FBS, 1
×105U/L青霉素, 1×105 U/L链霉素),1000 r/min,离心10 min,倾去上层脂肪及上清,基础培养基重悬细胞, 接种至25 cm2培养瓶内, ×104/cm2. 在37℃培养箱内培养,3 d后换液,观察原代细胞的生长. 细胞融合达90% g/L胰蛋白酶消化传代.
(基础培养液加10 nmol/L地塞米松,10 mmol/L β甘油磷酸钠,50 mg/L抗坏血酸[1])培养. 细胞融合达90% g/L胰蛋白酶消化传代.
×103/孔的密度接种于96孔板中,成骨诱导培养液诱导0,3,6,9,12,15 d后,PBS漂洗,加入50 μL细胞裂解液4℃过夜, ALP活性测定试剂盒检测ALP活性.