第三讲高效液相色谱的原理与构造.pptx

文档介绍：第三讲高效液相色谱的原理与构造精品文档内容概要一、高效液相色谱简介二、高效液相色谱的固定相和流动相三、高效液相色谱分离公式与术语四、液相色谱仪的基本配置五、检测器的种类和用途六、色谱柱简介2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所3一、什么是HPLC?高效液相色谱:—HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)—是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…—广泛应用于各个领域:医药,环保,石化,生命科学,食品,农业…—无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大的发展空间:超高压液相色谱(UPLC)的创立2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所4高效液相色谱的流程2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所5二、:-液分配及离子对分离固定相(1)全多孔型担体由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体;早期采用100μm的大颗粒,表面涂渍固定液,性能不佳已不多见;现采用10μm以下的小颗粒,化学键合制备柱填料;(2)表面多孔型担体(薄壳型微珠担体)30~40μm的玻璃微球,表面附着一层厚度为1~2μm的多孔硅胶。表面积小,柱容量底;2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所6(3)化学键合固定相化学键合固定相:目前应用最广、性能最佳的固定相;:≡Si—O—:≡Si—O—Si—C稳定,耐水、耐光、耐有机溶剂,应用最广;:≡Si—:≡Si—N2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所7化学键合固定相的特点:(1)传质快,表面无深凹陷,比一般液体固定相传质快;(2)寿命长,化学键合,无固定液流失,耐流动相冲击;耐水、耐光、耐有机溶剂,稳定;(4)选择性好,可键合不同官能团,提高选择性;(5)有利于梯度洗脱;存在着双重分离机制:(键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率:分配为主;低覆盖率:吸附为主;2019/6/-固吸附分离固定相种类:硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰***等;结构类型:全多孔型和薄壳型;粒度:5~10μm;2019/6/:(1)薄壳型离子交换树脂薄壳玻璃珠为担体,表面涂约1%的离子交换树脂;(2)离子交换键合固定相薄壳键合型;微粒硅胶键合型(键合离子交换基团)树脂类别:(1)阳离子交换树脂(强酸性、弱酸性)(2)阴离子交换树脂(强碱性、弱碱性)2019/6/26星期三浙江工业大学发酵工程研究所10