文档介绍：实验一植物基因组DNA提取一、每次实验前必须预****实验内容,了解实验的基本原理、操作步骤,禁止不预****就做实验。二、每次实验必须做好实验记录,每次实验完成后,根据记录写出实验报告。三、实验所得结果,如不再供下一次实验用,应交给指导教师,并注明名称、数量、组别、姓名等。四、实验室应经常保持整洁、桌面上不要乱放与本次实验无关的书籍、仪器、药品。火柴头、废纸、废液等应放入废液桶中。倒入水槽中的废液(无污染的)立即放水冲掉。五、爱护仪器、节约药品。仪器损坏后应立即报损,并按规定赔偿。六、试验、药品、公用器具使用后应立即放回原处,注意不要调错试剂瓶塞或滴管,以免污染药品。七、实验室必须安静,不得阅读与本次实验无关的书籍:禁止吸烟及吃食物。八、根据实验记录,及时完成实验报告,不按时交报告者,不予记录实验成绩。九、实验完毕,值日生应将实验室打扫干净,关好水、电、门、窗,离开实验室时,检查一遍,以免发生事故,确保安全。1DNA目的:了解植物细胞的特点,掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。原理:用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品,提取液中的乙二***四乙酸二钠(EDTA)能螯合金属离子,以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用,而细胞破碎液中的蛋白酶K在37?温浴过程中还能降解蛋白质,从而减少了蛋白质对DNA的污染。然后用CTAB处理,在特定的盐浓度下,CTAB使基因组DNA处于溶解状态,而蛋白质仍为沉淀。经细胞破碎液获得的DNA粗提取液再用酚、***仿、异戊醇处理,其中酚是高效的蛋白变性剂,可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉,然后用***仿、异戊醇处理,一方面可达到去蛋白的目的,另一方面还可去除残留的酚。一、材料植物的根、茎、叶。二、设备移液管,高速冷冻离心机,台式离心机,水浴锅。三、试剂1、CTAB或Nacl溶液:,缓慢加入10克CTAB,加水至100ml。2、其它试剂:***仿、异戊醇(24:1),酚:***仿:异戊醇(25:24:1),异丙醇,TE,10%SDS,蛋白酶K(20mg/ml),5mol/LNaCl。四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干,用蒸馏水洗两次,然后用超纯水洗一遍,吸干,-。2、将所取材料放入预冷的研钵(研钵提前要灭菌),研成粉末后置于7ml离心管内(可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulCTAB后用玻棒捣碎)。3、?预热的CTAB,充分混合后65?水浴90min以上,冷却到室温,加入等体积***仿异戊醇(24:1),轻轻颠倒混匀4?离心6000g×10min,取上清加入2/3体积的-20?预冷的异丙醇轻轻混匀,-20?度放置20min,4?离心25000g×5min,去上清。4、?CTAB温育30min,待沉淀充分溶解,加入等体积***仿异戊醇充分混匀,4?离心6000g×5min,去上清加入2/3体积的-20?预冷的异丙醇,轻轻混匀-20?放置20min。4?离心5000g×5min,去上清。5、用70%乙醇清洗沉淀两次,真空抽干,加入200μlTE溶解DNA后置于4?备用6、提示:酚、***仿、异戊醇的作用:酚与***仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或***仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或***仿挤去,使蛋白质失去水合状态而变性。变性蛋白质的密度比水的密度大,经过离心与水相分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开,而酚与***仿有机溶剂比重大,保留在最下层。作为表面变性剂的酚与***仿,在去除蛋白质的作用中,各有利弊。酚的变形作用大,但酚与水能有一定程度的互溶,因而损失了这部分水相中的DNA。***仿的变形作用不如酚效果好,但***仿不与水相容,不会带走DNA,所以在抽提过程中,混合使用酚与***仿效果最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚,由于酚与***仿是互溶的,可用***仿第二次变性蛋白质,此时一起将酚带去。也可以在第二次抽提时将***仿与酚混合(1:1)使用。异戊醇能降低分子表面的张力,可以减少抽提过程中的泡沫产生,同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。3PCR目的:学****PCR反应的基本原理及相关实验技术原理:聚合酶链式反应(PCR,polymerasechainreaction)实质是体内DNA复制的体外模拟。当双链DNA变性为单链以后,DNA聚合酶以单链DNA为模版,并利用反应混合物中的四种dNTP,以与模板互补的寡聚核苷酸链为引物,合成新的DNA互补链。新合成的DNA链的起点,由加入在反应混合物中的一对寡聚核苷酸引物在模板DNA链两端的结合点决定,经过PCR的循环即模板DNA变性为单链、引物与模板退火(杂交)、DNA合成三步骤的反复重复,最后,两条n引物结