文档介绍：承德医学院学报
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如细胞外激素或细胞表面受体,问题更为严重。 3/- 编码序列。应用酶切和连接技术成功构建了 3/-
正是由于这些困难,人们才致力于发展在哺乳动的哺乳类表达载体!"#$%& ’( ) 3/-,-./, ,为后续在真
物细胞中生产哺乳动物蛋白质的表达系统。但是建立核细胞高效、稳定表达 3/- 奠定了坚实的物质基础。
成功的哺乳动物细胞表达系统的关键之一就是构建表【参考文献】
达外源基因的重组载体。本实验中采用质粒!"#$%& ’[(] 6?@;ABC D6,EF"BG #E,#5AHCFA *<,BC FI ’ 3HCB;!J;CBKBJ?A:F
( ) *+,-./ 作为载体,该载体采用巨细胞病毒*01 强 A;LBI HB"JBCBM !J;CB?A ?AL;ILBM ?B JBK5IFC?;A ;4 O;AB MBAH?CG
启动子驱动外源基因的转录,可以在广泛的宿主细胞[P]’*BII,(QQ2,9Q,&8Q,&(Q ’
[ ] [R] SFH5MF T,6N?***@F $,$FUFKFVF $,BC FI ’=MBAC?CG ;4 ;HCB;"IFH,
内高水平表达外源蛋白 2 。将 3/- 的"#$% 用高保真
C;KBABH?H ?AN?O?C;JG 4F"C;J(3*=.)FAM ;HCB;!J;CBKBJ?A(3/-):F
的!45 #$% 聚合酶扩增后克隆于该载体上。在此载体
***@B"NFA?H@ OG VN?"N 3/- ) 3*=. ?AN?O?CH ;HCB;"IFHC;KBABH?H ?A
上有 6178 早期启动子及复制起始点,可用以在*362
L?CJ[; P]’:AM;"J?A;I;KG,(QQ9,(&Q,(&RQ,(&&2 ’
细胞中的质粒扩增,并驱动抗性基因的表达,
-7(9 [&] <;KBJH %,6FIBN -,TFAA;A <%,BC FI ’*?J"5IFC?AK BHCJFM?;I FAM
启动子用于驱动克隆入多克隆位点后的外源基
*01 ;HCB;!J;CBKBJ?A FH MBCBJ@?AFACH ;4 O;AB C5JA;LBJ FAM O;AB MBAH?CG
因表达。本研究中选用和作为克隆位
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点,所以在克隆 3/- 的"#$% 时,上游引物的>’端加((8):7728,772> ’
上:";< = 内切酶识别序列(-%%++*)和保护性碱基[7] 6"N;!!BC 0,IBJ %0,6"NFB4BJ P<,BC FI ’=A"JBFHBM ;HCB;,
( ),下游引物的’端加入的酶切位点。而[ ]
%*- > :";< ! !J;CBKBJ?A HBJ5@ IBLBIH ?A ***@BA ";J;AFJG FJCBJG M?HBFHB P ’ P
且为了使有效的翻译后获得正确的蛋白质产物,在下*I?A :AM;"J?A;I 0B