文档介绍：生物技术制药实验武汉大学药学院 生物技术实验室湖北·武汉目录实验一 质粒 DNA 的小量制备 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙2实验二  质粒 DNA 电泳鉴定 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙4实验三  感受态细胞的制备和转化 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙5实验四  目的基因的表达及表达产物的初步提取 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙8实验五  蛋白质纯化—盐析沉淀法 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙10实验六  凝胶过滤层析 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙14实验七 蛋白质免疫印迹实验(Western Blotting)∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙16实验八 HRP 结合物的过碘酸钠交联法 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙191实验一  质粒 DNA 的小量制备【目的】学会最常用的碱裂解法小量制备质粒 DNA 的方法。【原理】根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性 DNA 在拓扑学上的差异来分离。~ 这个狭窄的范围内,线性 DNA 双螺旋结构解开而被变性。尽管在这样的条件下共价闭合环状质粒 DNA 也会变性,但两条互补链彼此互相盘绕,仍会紧密结合在一起。当加入  的乙酸钾高盐缓冲液使 pH 恢复中性时,共价闭合环状质粒DNA 复性快,而线性的染色体 DNA 复性缓慢,经过离心与蛋白质和大分子 RNA 等发生共沉淀下去而被去除。【器材】超净工作台,接种环,酒精灯,台式离心机,旋涡混合器,微量移液器, 微量离心管,恒温摇床,试管,双面微量离心管架,试管架,标签纸,磁力搅拌机。【试剂】pET-28a 质粒载体菌, LB 培养基 1000ml(含 10mg/ml 卡那霉素),葡萄糖/Tris/EDTA溶液(溶液 I),NaOH/SDS 溶液 (溶液 II),KAc 溶液()(溶液 III),RNase A,95%乙醇,70%乙醇,TE buffer()。【实验准备】1. 配制卡那霉素储存液(无菌水配制 10mg/ml,分装后-20°C 保存)。2. 配制 LB 培养基(胰化蛋白胨 10g,酵母提取物 5g,NaCl 10g 加 200mL 双蒸水搅拌完全溶解,用约200mL 5N NaOH 调 pH 至 ,加双蒸水至 1L,121°C 灭菌 20min)。3. 溶液 I(50mmol/L 葡萄糖,25mmol/L Tris HCl ,10mmol/L EDTA )。溶液I可成批配制,每瓶约 100ml,在高压下蒸气灭菌 15 分钟,贮存于 4℃。溶液 II( NaOH,1% SDS);溶液 III(60mL 5mol/L Kac,加冰乙酸调 ,补双蒸水至 100ml)。4. 70%乙醇(-20°C 保存)。25. TE buffer(10mmol/L Tris HCl ,1mmol/L EDTA ,)。6. 试管洗净并塞上棉塞, 离心管装入灭菌盒,移液器吸头装入相应的吸头盒,高压灭菌(121°C, 30min)。【操作步骤】1. 在超净工作台中取 5ml LB(Amp+),加入灭菌的试