文档介绍：
自噬抑制药物氯喹在诱导肝癌细胞死亡中
的机制研究#
丁振斌,史颖弘,彭远飞,宋康*
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(复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032)
摘要:目的:研究自噬抑制药物氯喹(CQ)诱导肝癌细胞死亡中的作用及其相关机制,探
索自噬相关药物可能的临床应用价值。方法:选取三种公认的肝癌细胞系,给予不同浓度
CQ 干预 24h,应用 MTT 法检测增殖,应用 PI 染色法检测细胞死亡,应用 Hochest33342 染
色、TUNEL 染色、Caspase9 Western blot 法检测凋亡。应用 GFP-LC3 转染、LC3 Western blot
及细胞电镜技术检测细胞自噬功能。结果:MTT 检测显示 CQ 作用 24h 能够显著抑制肝癌
细胞增殖。CQ(≥20uM)干预细胞 24h 后,PI 染色阳性细胞明显增多,Hochest33342 核
染色发现核浓聚、核碎裂,TUNEL 染色阳性细胞明显增多,Caspase9 活化;而 CQ(5uM、
10uM)干预后 PI 染色阳性细胞无明显变化。CQ 处理细胞后 GFP-LC3 阳性细胞显著增
多,LC3-II 蛋白表达的显著增高。沉默 Atg5 的表达以及自噬抑制剂 3-MA 的预处理不能显著
抑制 40uM CQ 诱导的 97-L 细胞的死亡,而同时运用 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 和
3-MA 或沉默 Atg5 的表达,PI 染色发现细胞的死亡显著受到抑制。结论:小剂量 CQ(0~10uM)
可以抑制自噬降解,而大剂量 CQ(≥20uM)更显著地导致自噬小泡及自噬标志性蛋白在肿
瘤细胞内积聚,并直接诱导肝癌细胞死亡。其死亡形式既具有凋亡的特征又具有自噬样死亡
的特征。
关键词:自噬;肝细胞癌;凋亡;氯喹
中图分类号:R73-36+11
The death mechanism of HCC cells indued by
autophagy-related agent chloroquine
DING Zhenbin, SHI Yinghong, PENG Yuanfei, SONG Kang
(Liver Cancer Institute, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai, 200032)
Abstract: Purpose: To investigate the role of chloroquine (CQ) in inducing the death of HCC and
its underlying mechanism, and to explore the clinical application of autophagy-related agents.
Method: Three well-known HCC cell lines were treated with CQ at different concentrations for 24
hours. Then MTT assay was applied to determine the proliferation, and PI